15. Сплайсинг и редактирование.

Сплайсинг РНК - процесс удаления интронов из РНК и соединение экзонов (кодирующих последовательностей) при образовании зрелых молекул мРНК, подготовленных к трансляции . В процессе сплайсинга могут возникать разные варианты мРНК за счет удаления экзонов, расположенных между соседними интронами.

РНК редактирование - посттранскрипционный процесс изменения нуклеотидной последовательности РНК в результате делеций/ вставок/ замены одного или нескольких нуклеотидов.

16. Различные механизмы сплайсинга: Автосплайсинг, Trans- сплайсинг, Альтернативный сплайсинг.

Автосплайсинг - вид сплайсинга пре-РНК, когда интроны кодируют рибозимы - РНК с каталитической активностью, выполняющие роль сплайсосомы. То есть интронная последовательность катализирует свое собственное вырезание из молекулы РНК. Имеются три группы интронов, кодирующих рибозимы: Group I, II и III. Group II и III выполняют роль сплайсосомы без привлечения других белков.

Транс-сплайсинг – форма сплайсинга, при которой соединяются РНК разных транскриптов.

Альтернативный сплайсинг — вариант сплайсинга матричных РНК (мРНК), при котором в ходе экспрессии гена на основе одного и того же первичного транскрипта (пре-мРНК) происходит образование нескольких зрелых мРНК. Образование альтернативно сплайсированных мРНК находится под контролем системы транс-действующих белков (факторов сплайсинга), которые связываются с цис-сайтами первичного транскрипта.

17. Принципы репликации днк.

Принципы репликации

1. Комплементарность.

2. Антипараллельность.

3. Униполярность.

4. Потребность в затравке - для создания начального 5-участка растущей цепи и начала синтеза ДНК-полимеразой необходима сначала особая разновидность РНК-полимеразы, называемая ДНК-праймазой.

5. Прерывистость - репликация начинается одновременно в нескольких местах молекулы ДНК. Участок между двумя точками, в которых начинается синтез дочерних цепей, называется репликоном . Он является единицей репликации. В каждом репликоне есть репликативная вилка - часть молекулы ДНК, которая уже расплелась под действием ферментов. В каждой вилке несколько ферментов одновременно ведут синтез ДНК в виде фрагментов по 1000 нуклеотидов. Когда вилка перемещается, синтезированные фрагменты, комплементарные одной цепи, сшиваются друг с другом, образуя растущие дочерние цепи.

6. Полуконсервативность - каждая дочерняя ДНК состоит из одной матричной цепи и одной вновь синтезированной.

18. Доказательства полуконсервативного характера репликации.

В 1957 г. Метью Мезелсон и Франклин Сталь поставили эксперимент.

Они выращивали бактерии кишечной палочки на среде тяжелых изотопов азота 12 поколений.

После этого бактерии переносили на среду с легким изотопом азота.

Определить, какой азот был в молекулах ДНК, можно было по плотности.

У тяжелого изотопа плотность была выше.

Они отбирали пробы каждое поколение, контрольными служили бактерии со среды тяжелого изотопа.

Плотность определяли, смешивая ДНК с раствором хлористого цезия и центрифугируя на высокой скорости несколько дней, потом смотрели на место осаждения ДНК - у дна, в центре или верхней части пробирки.

Смотрели на спектрофотометре, так как известно, что ДНК поглощает свет с длиной волны 260 нанометров.

Спустя одно поколение плотность была промежуточной между легким и тяжелым изотопом.

Спустя два поколения у половины была плотность легкого изотопа, у половины осталась промежуточной.

Спустя три поколения - три четверти имели плотность легкого изотопа, одна четверть промежуточную.

Такое распределение подтверждало полуконсервативный тип репликации.