Методы диагностики вирусны инфекций
Диагностика вирусных инфекций
Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используются различные методы (см. ниже табл. 12).Вирусоскопическое исследование (световая микроскопия) позволяет обнаружить характерные вирусные включения, а электронная микроскопия -сами вирионы, и по особенностям их строения диагностировать соответствующую инфекцию (например, ротавирусную).
Вирусологическое исследование направлено на выделение вируса и его идентификацию.Для выделения вирусов используют заражение лабораторных животных, куриных эмбрионов или культуры тканей. Первичную идентификацию выделенного вируса до уровня семейства можно провести с помощью определения типа нуклеиновой кислоты (проба с бромдезоксиуридином) и особенностей ее строения (электронная микроскопия), размеров вириона (фильтрование через мембранные фильтры с порами диаметром 50 и 100 нм), наличия суперкапсидной оболочки (проба с эфиром), гемагглютининов (реакция гемагглютинации), типа симметрии нуклеокапсида (электронная микроскопия). Результаты оценивают заражая культуру ткани пробой, подвергнутой соответствующей обработке, и с последующим учетом результатов заражения методом цветной пробефильтрования. Существенное значение для идентификации вирусов (до рода, вида, внутри вида) имеет также изучение их антигенного строения, которое проводится в реакции вирусонейтрализации с соответствующими иммунными cыворотками. Сущность этой реакции состоит в том, что после обработки гомологичными антителами вирус утрачивает свою биологическую активность (нейтрализуется) и клетка хозяина развивается так же, как и неинфицированная вирусом. Об этом судят по отсутствию цитопатического действия, цветной пробе, результатам реакции торможения гемагглютинации (РТГА), отсутствию изменений при заражении куриных эмбрионов, выживаемости чувствительных животных.
Вирусологическое исследование - это “золотой стандарт” вирусологии и должно проводится в специализированной вирусологической лаборатории. В настоящее время оно используется практически только в условиях возникновения эпидемической вспышки того или иного вирусного инфекционного заболевания. Для диагностики вирусных инфекций широкое применение нашли методы иммунодиагностики (серодиагностики и иммуноиндикации). Они реализуются в самых разнообразных реакциях иммунитета радиоизотопный иммунный анализ (РИА), иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакция связывания комплемента (РСК), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), реакция торможения гемагглютинации (РТГА) и др.При использовании методов серодиагностики обязательным является исследование парных сывороток. При этом четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке в большинстве случаев служит показателем протекающей или свежеперенесенной инфекции. При исследовании одной сыворотки, взятой в острой стадии болезни, диагностическое значение имеет обнаружение антител класса IgМ, свидетельствующее об острой инфекции. Большим достижением современной вирусологии является внедрение в практику диагностики вирусных инфекций молекулярно-генетических методов (ДНК-зондирование, полимеразной цепной реакции - ПЦР). В первую очередь с их помощью выявляют персистирующие вирусы, находящиеся в клиническом материале, с трудом обнаруживаемые или необнаруживаемые другими методами.
