Лабораторная работа № 3.

Микроскопирование препаратов иммерсионным способом. Определение морфологической группы бактерий.

Оснащение: микроскопы, лампы настольные, иммерсионное масло.

Ход работы:

Настройка микроскопа:

1. Поставьте микроскоп штативом к себе, на расстоянии ладони от края стола.

2. Поместите препарат на предметный столик.

3. Вращая револьвер, поставьте в рабочее положение объектив с малым увеличением (×8).

4. Глядя в окуляр, осветите с помощью зеркала поле зрения.

5. Переместите револьвер на большее увеличение (объектив ×90).

Работа с иммерсионным объективом (×90):

Первый способ:

1. Нанести на препарат каплю иммерсионного масла.

2. Объектив погрузить в каплю масла почти до упора (смотреть сбоку на предметный столик).

3. Глядя в окуляр, очень медленно вращать макровинты на себя до появления изображения.

4. Микровинтами настроить резкое изображение.

Второй способ:

1. Нанести на препарат каплю иммерсионного масла.

2. Опустить объектив в каплю масла (смотреть сбоку на предметный столик).

3. Немного приподнять объектив (сделать небольшую масляную «ножку»).

4. Глядя в окуляр, медленно опускать объектив в масло до появления изображения.

5. Микровинтами настроить резкое изображение.

Форма отчетности: представить преподавателю сделанные препараты; в рабочей тетради зарисовать изображение препаратов в микроскопе, указать морфологическую группу бактерий, представить преподавателю убранное и продезинфицированное рабочее место.

Лабораторно – практическое занятие № 3

Протокол № 3

Тема: Изучение микрофлоры ротовой полости

Цель: Изучить разнообразие микрофлоры биотопов ротовой полости здорового человека

Задачи:

5. закрепить навыки взятия мазков из ротовой полости;

6. - закрепить навыки работы по алгоритму микробиологических исследований;

7. - провести учет полученных результатов;

8. - освоить принципы постановки и оценки результатов антибиотикочувствительности;

9. - обеспечить инфекционную безопасность при проведении работы.

Практическая часть:

Лабораторная работа № 1

Изучение мазков микрофлоры ротовой полости

1.Зонд – тампоном провести по внутренней стороне щеки, не касаясь губ, зубов, десен.

2.Нанести полученный биоматериал на подготовленное предметное стекло

3. Зафиксировать полученный мазок.

4. Окрасить по Граму

Лабораторная работа № 2

Определение культуральных свойств микроорганизмов

При изучении морфологической характеристики используйте характеристики S- и R- формы колоний из данного списка:

− морщинистая, гладкая;

− блестящая, матовая;

− сухая, влажная;

− гомогенная, гетерогенная;

− круглая, неправильная форма;

− неровные края, ровные края;

− врастает в среду, находится на поверхности среды.

Лабораторная работа № 3

Методика работы с оптическим стандартом мутности

Ход работы:

Стандарт мутности – количество млрд. микробов в 1 мл взвеси.

1. Приготовить микробную взвесь. В пробирку с чистой культурой, выросшей на скошенном агаре, добавить 5 мл физиологического раствора и смыть культуру с поверхности среды, вращая между ладонями. При работе с колониями на чашках Петри в пробирку с 5 мл изотонического раствора добавить 1 – 2 петли культуры. Аккуратно смыть и равномерно распределить, вращая пробирку между ладонями 10 минут.

2. Сравнить мутность полученной взвеси с мутностью оптического стандарта и определить количество микробных тел по номеру мутности.

Лабораторная работа № 4

Проведение поверхностного посева «сплошным газоном»

1. На питательный агар нанести 2 – 3 петли полученной взвеси

2. Шпателем Дригальского тщательно растереть взвесь по поверхности агара.

3. На посев «сплошным газоном» поместить диски с антибиотиками.

4. Промаркировать чашки Петри и поставить в термостат вверх дном.

Задание №2. Определить чувствительность к антибиотикам выделенных культур методом дисков, провести учет результатов.

Оснащение: Чашки с тестируемыми культурами, линейки, дезинфицирующие средства.

Ход работы:

1. Рассмотрите флаконы с дисками, напишите в тетради перечень препаратов.

2. Возьмите в руки чашку с культурой дном вверх.

3. Определите наличие зоны задержки роста микробов вокруг дисков с разными антибиотиками.

4. Определите размер зоны с помощью линейки (измеряется диаметр зоны вместе с диском) и определите степень чувствительности микроорганизма к антибиотику:

Зона более 10 мм – чувствительный (Susceptible)

Зона менее 10 мм – малочувствительный (Intermediate)

Зона отсутствует – устойчивый (Resistant)

5. Отметьте в строке над списком антибиотиков № чашки, которую вы оцениваете.

6. Напротив названия препарата поставьте обозначение S, I, или R , в зависимости от наличия и размера зоны задержки роста.

7. Оцените подобным образом 4-5 чашек.

Лабораторная работа № 5

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Микробиологический метод - Изучение живых или убитых микроорганизмов в окрашенном или неокрашенном виде с помощью микроскопа. Достоинства метода: быстрое исследование. Но так как микробы похожи друг на друга, он является ориентировочным.

2. Бактериологический метод – Выращивание микроорганизмов на питательных средах. При этом выделяют чистую культуру и изучают ее свойства. С этой целью исследуемый материал засевают на плотные или жидкие питательные среды и идентифицируют микроб, устанавливают его свойства.

3. Серологический метод – поиск специфических антител в сыворотке больного.

4. Биологический (экспериментальный) метод – материал от больного вводят в лабораторных животных (мыши, морские свинки). В их органах и тканях как в питательных средах происходит размножение микробов (возбудители столбняка, ботулизма).

5. Метод аллергических проб – путем этого метода выявляется сенсибилизация - повышенная чувствительность организма к микробным антигенам. Аллерген вводится внутрикожно. При положительной реакции появляется припухлость, покраснение.

Лабораторная работа № 6

ВЗЯТИЕ ПРОБ НА АНАЛИЗ И ДОСТАВКА ИХ В ЛАБОРАТОРИЮ.

Общие правила.

1. Пробы берутся чисто вымытыми руками, в перчатках.

2. Пробы для выделения культуры микроба помещают в стерильную посуду.

3. Пробы для серологических реакций (определение антител в сыворотке больного) помещаются в нестерильную посуду.

4. Проба доставляется в лабораторию в течение одного – двух часов после взятия материала, кроме проб на менингит, которые доставляются немедленно.

Забор материала:

1. Взятие крови на стерильность производится из локтевой вены в количестве 5 – 10 мл и непосредственно у постели больного засевается в 10 – кратное количество сахарного бульона.

2. Взятие гноя из открытого очага производится для выделения культуры микроба и определения чувствительности к антибиотикам. Пробы берутся стерильным ватным тампоном из глубоких слоев раны. Верхний слой гноя предварительно удаляется стерильным марлевым шариком.

3. Взятие гноя из закрытого очага производится стерильным шприцем. Место укола протирается спиртом. В шприц набирают 2 – 3 мм гноя и выливают в сухую стерильную пробирку.

4. Мазки из зева и носа на носительство патогенных кокков берутся у всех работников родильных домов и грудничковых групп больниц. Мазки берутся раздельно из зева и носа стерильными ватными тампонами и помещаются или в сухие стерильные пробирки, или в солевой бульон.

5. Посев на стерильность шовного и перевязочного материала производится в баклаборатории. Пробы помещаются в стерильные широкогорлые флаконы или колбы.

6. Анализ на дифтерию. Мазок берется раздельно из носа и зева стерильным ватным тампоном и помещается в сухие стерильные пробирки.

7. Анализ на дизентерию. Пробы берутся стерильным ватным тампоном непосредственно из прямой кишки или из освобожденного от хлора судна. Пробы помещаются в консервирующую смесь или непосредственно у постели больного засеваются на среду Плоскирева.

8. Анализы на брюшной тиф.

• Взятие крови на гемокультуру производится из локтевой вены 5 – 10 мл и непосредственно у постели больного засевается в 10 – кратное количество желчного бульона;

• Кровь на реакцию Видаля берется в течение всего заболевания из локтевой вены в количестве 2 – 3 мл и помещается в сухую не стерильную пробирку;

• Кал на выделение культуры микроба берется стерильным тампоном непосредственно из прямой кишки или из судна, горшка, освобожденных от хлора. Проба помещается в сухую, стерильную пробирку или в консервирующую смесь, состоящую из глицерина или физиологического раствора.

Освобождение судна от хлора. Судно промывается под струей горячей воды, затем струей холодной воды. Дают воде стечь. На дно стелют стерильную салфетку и дают больному.

9. Проба на холеру. У больных берется 50 – 70 грамм (2 - 3 столовые ложки) испражнений или рвотных масс. Выливаются в широкогорлые флаконы, которые закрываются корковыми или резиновыми пробками. Помещаются в металлические барабаны и специальным транспортом направляются в лабораторию.

10. Взятие крови на реакцию Вассермана. Кровь берется у всех беременных, назначенных на операцию, стерильно из локтевой вен в количестве 8 – 10 мл и помещается в сухую, чистую, стерильную пробирку, очень медленно.

Лабораторно – практическое занятие № 4