ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НИЖЕГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ

«НИЖЕГОРОДСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ»

Лаборатория микробиологических методов исследования и техники лабораторных работ.

Методические рекомендации

для обучающихся по специальности 34.02.01 Сестринское дело

к проведению лабораторно – практических занятий

по дисциплине ОПД. 06 Основы микробиологии и иммунологии

Нижний Новгород

2017

Лабораторно – практическое занятие № 1

Протокол № 1

Тема: Освоение бактериологического метода исследования микроорганизмов.

Цель: Получить представление об устройстве и работе микробиологической лаборатории

Задачи:

1. Изучить правила техники безопасности

2. Приобрести знания о помещениях бактериологической лаборатории и их предназначении.

3. Приобрести навыки приготовления микробиологического мазка из жидкой культуры.

4. Приобрести навыки окрашивания по Граму.

Практическая часть:

Лабораторная работа № 1

«Правила техники безопасности при работе в бактериологической лаборатории»

Ход работы:

1. Ознакомиться с инструкциями №

2. Выписать в Протокол занятия основные положения Правил ТБ

3. Выучить правила техники инфекционной безопасности.

ПРАВИЛА ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

ПРИ РАБОТЕ В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ.

1. Не входить в лабораторию в верхней одежде (пальто, головном уборе) не вносить посторонние вещи.

2. В бактериологической лаборатории запрещается принимать пищу, напитки, разговаривать по сотовому телефону.

3. Приступать к занятиям, только надев хлопчатобумажный халат, шапочку и сменную обувь.

4. Строго соблюдать правила обращения с химическими реактивами и красителями.

5. С большой осторожностью пользоваться спиртами (огнеопасно!!!).

6. Помнить, что некоторые микроорганизмы, особенно споры грибов, являются аллергенами. Не допускать их распыления – не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки, колбы с культурами микроорганизмов.

7. Обязательно следить за порядком и чистотой в лаборатории и своим рабочим местом. После занятия обязательно протереть иммерсионный объектив микроскопа мягкой салфеткой, накрыть микроскоп чехлом, убрать в шкаф.

8. Рабочее место, инструменты и лабораторную посуду вымыть и простерилизовать (по необходимости).

9. Обязательно вымыть руки после работы в микробиологической лаборатории.

10. Материал, поступающий в лабораторию для исследования всегда считать инфицированным / заразным. Исследуемый материал и отработанные культуры полежат уничтожению.

11. При попадании исследуемого материала на поверхность лабораторной мебели, ее обрабатывают дезраствором, руки тщательно моют с мылом.

12. Помнить, что студенты несут ответственность за используемые ими микроскопы, другое лабораторное оборудование, чистоту рабочего места.

13. Перед уходом из лаборатории дежурный проводит влажную уборку помещения с дез.средством, проверяет, выключены ли вода, свет, электроприборы.

ПРАВИЛА ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ

ПРИ РАБОТЕ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ

1 Перед работой убедитесь в исправности осветительных приборов и целостности проводки.

2 Работать с электроприборами разрешается сухими руками.

3 Переставлять и переносить осветительные приборы, микроскопы во включенном состоянии недопустимо.

4 Перед работой проверьте плотность прилегания штуцера к корпусу спиртовки.

5 Зажигайте спиртовку спичкой. Гасите, накрывая пламя колпачком. Не передвигайте горящую спиртовку.

Лабораторная работа № 2

«Устройство микробиологической лаборатории»

Медицинская бактериологическая лаборатория является одним из основных подразделений больниц, санитарно – эпидемиологических станций, научно - исследовательских институтов. Исследования в лаборатории проводятся как с диагностической, так и с научной целью. В бактериологической лаборатории выделяют «чистую» и «заразную» зоны.

В чистой зоне расположены помещения, где отсутствует контакт с биологическим материалом: гардероб, санпропускник, комната приема пищи, ординаторская, складские помещения (материальные: полотенца, вата, среды и т.д.).

Заразная зона баклаборатории имеет ряд помещений:

1 Лабораторная комната служит для проведения бактериологических исследований.

2 Средоварня служит для приготовления и разливания питательных сред.

3 Моечная – для обработки и подготовки посуды для стерилизации.

4 Автоклавная – стерилизационная комната.

5 Бокс служит для проведения работ в асептических условиях.

6 Комната регистрации и приема материала – для анализа.

В каждой комнате должны быть раковины, стены покрыты кафелем, пол – линолеумом. Для выращивания микробов необходимы особые приборы – термостаты. Для стерилизации необходимы автоклавы и сушильные шкафы.

Оборудование рабочего стола лаборанта/санитарного фельдшера.

1 Спиртовка

2 Бактериологические петли, иглы, шпатели

3 Предметные и покровные стекла

4 Вата или марлевые салфетки

5 Мыло

6 Карандаши по стеклу

7 Спички

8 Пипетки

9 Наборы красителей: генцианвиолет, водный раствор фуксина, раствор Люголя, Спирт 95º.

10 Колба для воды

11 Стакан или банка с дезинфицирующим раствором

12 Банка для мусора

13 Пинцеты

14 Иммерсионное масло

15 Микроскоп

16 Микробиологический мостик

17 Кристаллизатор (простоквашница)

Практическое задание:

Собрать рабочий стол лаборанта/санитарного фельдшера.

Лабораторная работа № 3

«Приготовление микробиологического мазка из жидкой культуры»

На исследование мазок можно брать как из жидкой, так и из плотной культуры. Если мы работаем с плотной питательной средой, то мазок эмульгируется в капле воды. Жидкая питательная среда не требует дополнительного разведения.

Ход работы:

1. чистые сухие предметные стекла обезжирить, натерев их кусочком мыла, а затем протерев марлевой салфеткой.

2. на обезжиренное стекло нанести пипеткой каплю воды (для плотной культуры).

3. профламбировать микробиологическую петлю в пламени спиртовки (кольцо, проволочную ножку до держателя).

4. охладить петлю о стенку пробирки или крышку чашки Петри.

5. захватить петлей часть культуры

6. опустить петлю с культурой на стекло в каплю воды и тщательно растереть (эмульгировать) до гомогенного тонкого ровного слоя.

7. профламбировать петлю, сжечь остатки культуры.

8. мазок высушить на воздухе.

9. высушенный мазок зафиксировать над пламенем спиртовки (3 – 5 сек) трижды медленно проводя через пламя. На этом этапе мазок закрепляется на стекле, микробы инактивируются, убитые микроорганизмы лучше воспринимают краску.

Окрашивание по Граму.

Традиционный метод окрашивания микроорганизмов, предложенный Грамом.

1. на фиксированный мазок нанести 1 – 2 капли генцианвиолета на 3 – 5 мин.

2. промыть водой, держа препарат ребром.

3. нанести раствор Люголя на 1 – 2 мин.

4. дифференцировать в этиловом спирте до почернения препарата и отхождения облачков краски 30 – 60 сек.

5. промыть водой.

6. докрасить водный раствором фуксина 30 – 60 сек.

7. тщательно промыть водой, высушить, микроскопировать с иммерсией.

Результат окрашивания: гр+ - сине – фиолетовые, гр- красные.

ЗАПОМНИТЬ:

Грам-положительные микроорганизмы	Грам-отрицательные микроорганизмы
Стафилококки	Менингококки (бобовидные)
Стрептококки	Гонококки (бобовидные, в оболочке лейкоцитарной)
Пневмококки (пламя свечи)	Эшерихии (кишечная палочка)
Палочки сибирской язвы	Сальмонеллы
Палочки дифтерии	Шигеллы (дизентерия)
Палочка Коха (туберкулеза)	Холерный вибрион
Клостридии столбняка	Палочка чумы
Клостридии ботулизма	Возбудитель бруцеллеза
Клостридии (перфрингенс) газовой гангрены	Возбудитель коклюша

Приложение 1