СОЗДАНИЕ И СКРИНИНГ БИБЛИОТЕК ГЕНОВ
Библиотека генов, геномная библиотека – набор клонированных фрагментов ДНК, в совокупности составляющих индивидуальный геном
МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ
ГЕНЕТИЧЕС
КИЕБИБЛИ
ОТЕКИ
СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
РЕКОМБИНАНТНЫЙ ВЕКТОР
ApR |
TcR |
pBR32
2
Ori
Ap – ампициллин Tc – тетрациклин
Ap |
Ap + |
|
Tc |
СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
РЕКОМБИНАНТНЫЙВекторы прямогоВЕКТОР
отбора
ApR |
LacZ |
Для того, чтобы отбор |
|
|
|
|
pUC19 |
работал, нужен |
|
специальный штамм |
|
|
|
|
|
|
E. coli lacZ M15 |
Ori
α-Комплементация. Активная β-галактозидаза – это тетрамер. Делеция lacZ M15 удаляет аминокислотные остатки 11–41. Белок с такой делецией (ω-фрагмент) может димеризоваться, но не может тетрамеризоваться. Амино-концевой фрагмент β-галоктазидазы, соответствующий остаткам 3–92 (α-fragments) восстанавливает ферментативную активность LacZΔM15, переводя белок в тетрамерную форму.
СЕЛЕКЦИЯ КЛОНОВ, НЕСУЩИХ
РЕКОМБИНАНТНЫЙОтбор синее/белоеВЕКТОР
ApR |
LacZ |
pUC19
Ori
Ap + X-
Gal
X-gal
5-бромо-4-хлоро-3-индоил- |
5-бромо-4-хлоро- |
5,5'-дибромо-4,4'-дихлоро-индиго, |
|
бета-D-галактопиранозид |
3-гидроксииндол |
нерастворимый окрашенный |
. |