3. Практическая работа студента

3.1. Участие в выполнении зоогигиенических, профилактических и ветеринарно-санитарных мероприятий

АНТИГЕН БРУЦЕЛЛЕЗНЫЙ ДЛЯ РОЗ-БЕНГАЛ ПРОБЫ (РБП).

Непрозрачная жидкость малиново-розового цвета.

Применяется в лабораториях ветеринарной медицины для исследования сывороток крови при диагностике бруцеллеза у сельскохозяйственных животных: крупный и мелкий рогатый скот, лошади, свиньи, верблюды, северные олени.

Сыворотки крови, которые исследуются, должны быть прозрачные, без примесей и эритроцитов; взяты не позднее 4-х суток хранения при температуре от (4 до 8) ° С.

Консервированные сыворотки пригодны для исследования в течение 14 дней. Не прозрачные, подозрительные сыворотки исследованию не подлежат.

Постановка Роз-Бенгал пробы.

Оборудование, необходимое для постановки Роз-Бенгал пробы.

— белые металлические эмалированные, фарфоровые или глазурованные керамические пластинки с лунками;

— шприц полуавтомат (дозатор, капельница) для дозирования сыворотки;  — калиброванные пипетки, дозатор (капельница) для дозирования антигена;  — ручной смеситель для  25 лунок диагностических пластин;  — автоматический прибор для покачивания диагностических пластин;  — сигнальные часы.

Компоненты для Роз-Бенгал пробы.

— бруцеллезный антиген, окрашенный бенгальских розовым (антиген для Роз-Бенгал пробы);  — исследуемые сыворотки крови животных;

-положительная бруцеллезная и отрицательная сыворотки;  — 0,5% фенолизированый физиологический раствор.

Техника постановки Роз-Бенгал пробы.

Перед использованием антиген выдерживают 30-40 минут при комнатной температуре, а затем тщательно встряхивают.

Перед началом работы ставят контроль антигена с положительной бруцеллезной и отрицательной сыворотками, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию с физраствором. Для этого описанным ниже способом смешивают по 0,03 см³ антигена отдельно с обеими сыворотками и физиологическим раствором.

Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных, фарфоровых или глазурованных керамических пластинках с лунками при температуре не ниже 18 ° С. На бортиках пластин против каждой лунки записывают номер исследуемой сыворотки.

Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 см³ (1 капля) вносят на дно лунки с помощью шприца полуавтомата (ШПРБ-1), дозатора или микропипетки. После внесения каждой сыворотки шприц-полуавтомат (ШПРБ-1) или микропипетку трижды промывают фенолизированным физраствором и подсушивают фильтровальной бумагой, наконечник дозатора используют один раз.

При исследовании сывороток крови крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов, свиней в каждую лунку, рядом с сывороткой с помощью пипетки-капельницы вносят 0,03 см³ (две капли) антигена, а при исследовании сывороток крови овец, коз, северных оленей 0,015 см³ (одну каплю) антигена. Затем антиген тщательно смешивают с каждой каплей сыворотки крови с помощью ручного смесителя до получения однородной смеси, распределяя ее при этом по всей поверхности лунки. После смешивания сывороток каждого ряда лунок смеситель ополаскивают в фенолизированном физиологическом растворе и просушивают с помощью марлевой салфетки или фильтровальной бумаги.

Пластинку с сыворотками и антигенами покачивают в течение 4 минут осторожными круговыми движениями вручную или с помощью автоматического прибора, который предназначен для этого. При положительной реакции в смеси в течение 4 минут возникают различной величины хлопья аглютината розового цвета.

Учет и оценка реакции.

Учет реакции проводят визуально при достаточном естественном или искусственном освещении, слегка наклоняя пластинки. Учет агглютинации проводят в течение 4-х минут после смешивания сыворотки с антигеном.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной агглютинации окрашенных бруцелл антигена в виде мелких или крупных хлопьев розового цвета, четко выделяются на белом фоне лунки.

При отсутствии агглютинации (смесь гомогенная, равномерно прокрашена) реакцию считают отрицательной. Реакцию, которая начинается позже, чем через 4 минуты с момента смешивания, не учитывают. При нечетко выраженной агглютинации проводят повторное исследование этой сыворотки. По результатам повторного исследования дают заключительную оценку реакции (положительная или отрицательная). После учета реакции пластинки дезинфицируют погружением на 5 минут в 2,5-5% раствор хлорамина, затем тщательно моют водопроводной водой, высушивают.

Постановка реакции Роз-бенгал пробы

Все пробы дали отрицательный результат

Внизу два контрольных ряда: 1- отрицательный; 2- полжительный