8. Культуры клеток (тканей).

Культуры ткани - это клетки ткани выращенные вне организма на специальной питательной. среде. Клетки ткани в искусственных условиях сохраняю? присущи им обмен и восприимчивость к определенным вирусам. Для культивирования вирусов особенно пригодны клетки с быстрым ростом. По этой причине широко применяют эмбриональные ткани (фибробласты куриных эмбриовов, клетки человека к др., а также культуры тканей опухолей (клетки-Неla, Нер-2 и др.).

Кулътивирование клеток может призойти в специальных флаконах (колбы-матрацы, флаконы Карреля) и в пробирках. Культура клеток для роста должна иметь какую-либо опору, например, стенку пробирки.

В выросшую культуру ткани, которая покрывает стенку сосуда в виде однослойного клеточного пласта, засевают материал, содержащий вирус. Работу производят в стерильных условиях. Для подавления роста микрофлоры вируссодержащий материал предварительно обрабатывают антибиотиками, чаще пенициллином и стрептомицином. Питательной средой для культуры ткани могут быть различные растворы, сослав которых приближается к составу жидкости организма (синтетическая среда 199, солевой раствор Хенкса с сывороткой, гидролизат лактальбумина с сывороткой и другие).

9. Признаки размножения вирусов в курином эбрионе. "эффект карликовости" (замедление роста), мумификация, шарообразная форма зародыша и гибель на 3—6-й день после заражения.

10. Методы обнаружения вируса в культуре клеток.

О наличии и размножения вируса в клетках узнают по так называемому цитопатическому эффекту: в результате размножения вируса клетки гибнут, и под микроскопом заметны дегенеративные изменения клеток. Пласты зараженных клеток отслаиваются от стенки пробирки или флакона. Так как рост клеток прекращается, pН среды мало изменяется по сравнению с контролем (клетки без вируса).

1. Развитие специфической дегенерации клеток – смотрят под микроскопом: образование многоядерных гигантских клеток, округление клеток, очаги клеточной пролиферации.

2. Обнаружение внутриклеточных включений – в цитоплазме или ядре (окрашивают и смотрят под микроскопом).

3. Обнаружение специфического Аг методом иммунофлюоресценции.

4. Положительная реакция гемадсорбции.

5. Положительная реакция гемагглютинации.

6. Образование бляшек – появляются обесцвеченные участки в культуре, состоящие из погибших клеток – это колонии вируса. Окрашивают красным красителем – бляшки круглые, светлые.

11. Цитопатический эффект, определение, классификация.

Цитопатическии эффект - дегенерация клеток, возникающая под действием размножающегося в культуре ткани вируса. Микроскопически цитопатическое действие, выражается в различных изменениях морфологии клеток, образовании гигантских многоядерных клеток (симпластов), пикнозе ядер и, наконец, в полной деструкции клеток. Макроскопически заметно слущивание клеток со стенок пробирки. Характер клеточной дегенерации зависит, в основном, от вида вируса.

12. Методы типирования вирусов:

Определение типа вирусов в вирусосодержащем материале основа­но на нейтрализации вируса типоспецифическими сыворотками. Конечный результат реакции может быть установлен на основании следующих признаков:

1)нейтрализация ЦПД;

2)нейтрализация реакции гемадсорбции;

3)цветная проба;

4)задержка (торможение) гемагглютинации;

5)свечение клеток, содержащих вирус, под влиянием типоспецифиаческих флуоресцирующих сывороток;

6)нейтрализация в опыте на животных.