- •Приготовление гистологического препарата.
- •Методы окрашивания гистологических препаратов
- •Общие методы окраски
- •3. Выявление неклеточных структур соединительной ткани.
- •5. Выявление элементов нервной системы.
- •Цитология
- •Цитолемма
- •Гиалоплазма
- •Органеллы
- •Строение и функции мембранных органелл
- •Митохондрии
- •Эндоплазматическая сеть (эпс)
- •Ядро. Клеточный цикл
- •Кариолемма
- •Кариоплазма
- •Хроматин
- •Ядрышко
- •Клеточный цикл.
- •Эмбриология
- •Оплодотворение
- •Гаструляция
- •Образование осевых зачатков органов
- •Общие принципы организации тканей. Эпителиальные ткани
- •Ткани внутренней среды
- •Форменные элементы крови
- •Кроветворение
- •Соединительные ткани
- •Межклеточное вещество соединительной ткани
- •Соединительные ткани со специальными свойствами
- •Скелетные соединительные ткани
- •Мышечные ткани
- •Скелетная мышечная ткань
- •Сердечная мышечная ткань
- •Нервная ткань
- •Развитие нервной ткани
- •Нейроны
- •Нейрофибриллы
- •Нейроглия
- •Нервные волокна и нервные окончания
- •Безмиелиновые нервные волокна.
- •Миелиновые нервные волокна.
- •Перехваты Ранвье.
- •Приготовление гистологического препарата
- •Методы окрашивания гистологических препаратов
- •Общие методы окраски
- •3. Выявление неклеточных структур соединительной ткани
- •Цитология: клетка, мембраны, органеллы, включения.
- •Понятие о дифференцировке
- •Межклеточные соединения (контакты)
- •Цитоплазма
- •Мембранные органеллы
- •Ядро. Деление клетки
- •Клеточный цикл для клеток, прекращающих деление
- •Митоз. Стадии митоза.
- •Эмбриология. Строение гамет, оплодотворение, дробление
- •Половые клетки
- •Оплодотворение
- •Дробление
- •Гаструляция
- •Образование осевых зачатков органов
- •Эпителиальные ткани. Определение и источники развития Покровные эпителии
- •Железистые эпителии
- •Кровь и лимфа. Строение и функции форменных элементов крови
- •Кроветворение. Эмбриональное и постэмбриональное кроветворение
- •Классификация, строение собственно соединительных тканей.
- •Cкелетные соединительные ткани Классификация хрящевых тканей
- •Мышечные ткани
- •Классификация мышечных тканей
- •Гладкие мышечные ткани
- •Сердечная поперечно-полосатая мышечная ткань
- •Гладкая мышечная ткань
- •Нервная ткань: нейроны и нейроглия
- •Подразделение нейронов по числу отростков
- •Нервные волокна и нервные окончания. Разновидность и строение нервных волокон и нервных окончаний Нервные волокна
- •Классификация нервных окончаний
- •Синапсы
Приготовление гистологического препарата
По характеру взятого материала различают следующие виды гистологических препаратов:
а) срезы органов (толщиной 5-15 нм),
б) мазки (крови, костного мозга и т.д.),
в) плёнки (брюшины, мягкой мозговой оболочки), или тотальные препараты
Чаще всего используются срезы.
Приготовление препарата обычно включает следующие этапы:
1. Взятие и фиксация материала. Из соответствующего органа вырезают небольшие кусочки (0,5x1x1 см) и погружают их в фиксатор (формалин, метанол и т.д.) - обычно на 24 ч. Фиксация производится для предупреждения процессов аутолиза (самопереваривания) тканей. Это достигается путём денатурации (коагуляции) белков. После фиксации образцы промывают проточной водой в течение нескольких часов.
2. Обезвоживание и уплотнение материала. Затем образцы уплотняют - чтобы в последующем их можно было резать на микротоме.
Часто в качестве уплотнителя используют парафин. Предварительно образцы обезвоживают
Для этого их “проводят” по батарее спиртов -70 % , 80 % , 96 % , 100 % этанол - по 24 часа в каждом спирте.
3. Заливка: помещают образцы в смесь ксилол-парафин и затем в жидкий парафин на 1-2 ч при 52-56 о С. Дают парафину, остывая, затвердеть; вырезают из него блок с заключённым образцом и закрепляют на деревянном кубике. Микротомный нож, направляемый под углом к поверхности парафинового блока, срезает с него тонкой слой органа (срез) заданной толщины.
Срезы помещают на поверхность тёплой воды для их расправления, а затем - на предметное стекло.
4. Окрашивание препаратов и заключение в консервирующую среду. Перед окрашиванием образцы освобождают от парафина, проводя по батарее растворителей: ксилол, спирт 100 %, 96 %, 80 %, 70 %, 60 %, вода (по 2-5 мин).
Для окрашивания предметные стёкла со срезами помещают на короткое время в раствор красителя, промывают водой, обрабатывают раствором другого красителя (если таковой используется тоже) и вновь промывают водой.
Наконец, на препарат наносят каплю канадского бальзама (в случае среза) или кедрового масла (на мазки крови) и накрывают покровным стеклом.
Таким образом, приготовление гистологического препарата - весьма долгая и трудоёмкая процедура. Но при правильном её выполнении полученный препарат может храниться неопределённо долгое время.
Методы окрашивания гистологических препаратов
Все красители, используемые в гистологической технике, подразделяются на 4 типа: кислые, основные, нейтральные и индифферентные. Кислые красители – это кислоты и кислые соли (эозин и кислый фуксин) Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям).
Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна).
Основные красители - основные соли (гематоксилин, азур2 и кармин). Красящиеся структуры - это структуры, богатые нуклеиновыми или иными кислотами - ядра, рибосомы, аморфный компонент межклеточного вещества.
Нейтральные красители - смесь двух красителей: основного (азур2) и кислого (эозин). Структуры, воспринимающие кислые красители, окрасятся эозином; пример - специфические гранулы в эозинофильных лейкоцитах. Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2.
Индифферентные красители. Судан III, судан IV. Суданом окрашиваются жировые капли (в которых он растворяется).