Лабораторное занятие 5

Тема: Обмен сложных белков. Обмен нуклеотидов. Обмен гемопротеидов

Задания для подготовки к занятию:

1. Выберите положения, правильно характеризующие функции АТФ в организме:

А. Продукт окислительного фосфорилирования

Б. Источник энергии при связывании аа-тРНК с рибосомой

В. Субстрат аденилатциклазы

Г. Регулятор метаболических процессов

Д. Донор фосфата в реакциях, катализируемых протеинкиназами

Е. Источник энергии для транспорта веществ путем облегченной диффузии

2. Нарисуйте пуриновое кольцо и покажите происхождение в нем отдельных атомов.

3. Напишите реакции, в ходе которых ИМФ превращается в ГМФ и АМФ, укажите ферменты.

4. При катаболизме пуриновые основания превращаются в мочевую кислоту, используя цифровые обозначения, расположите перечисленные метаболиты в порядке их превращения в мочевую кислоту:

1. АМФ; 2. мочевая кислота; 3. ксантин; 4. инозин; 5. аденозин; 6. гипоксантин.

5. Расположите перечисленные метаболиты в порядке их участия в синтезе пиримидиновых нуклеотидов:

1. СО₂; 2. ОМФ; 3. АТФ; 4. карбамоилфосфат; 5. глутамин; 6. карбамоиласпартат; 7. УМФ; 8. ФРДФ; 9. дигидрооротат; 10. оротат; 11. аспартат.

6. Напишите схему синтеза гема.

7. Напишите схему катаболизма гема до образования конечных продуктов, выделяемых из организма.

1. Заполните таблицу дифференциальной диагностики различных типов желтух

Название желтухи	Причины возникновения	Биохимические показатели обмена билирубина
		кровь			моча		кал
		общий билирубин	непрямой билирубин	прямой билирубин	прямой билирубин	уробилин	стеркобилин

Лабораторная работа № 13

Тема: Определение содержания билирубина в сыворотке крови

Цель: Научиться определять содержание билирубина в сыворотке крови, изучить значение этого показателя для дифференциальной диагностики патологий (желтух).

Принцип метода:

Прямой (связанный, конъюгированный с глюкуроновой кислотой) билирубин непосредственно реагирует с диазотированной сульфаниловой кислотой, а общий билирубин – в присутствии кофеинового реагента с образованием окрашенного азосоединения. Интенсивность окраски реакционной среды пропорциональна концентрации билирубина и измеряется фотометрически при длине волны 535 (500-560) нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.

Схема постановки опыта:

Подготовьте пробы следующего состава	Опытная проба		Контрольная проба	Калибровочная проба
	Общий билирубин	Прямой билирубин
Сыворотка, мл	0,2	0,2	0,2	-
Реагент №1, мл	1,4	-	-	1,4
Реагент №4, мл	0,2	1,6	1,8	0,2
Калибратор, мл	-	-	-	0,2
Диазореагент, мл	0,2	0,2	-	0,2

Пробы тщательно перемешайте.

Для определения прямого билирубина (точно!) через 5 минут (комнатная температура) измерьте величину оптической плотности опытной пробы против контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560).

Для определения общего билирубина через 20 мин (комнатная температура) измерьте величину оптической плотности опытной пробы против контрольной пробы при длине волны 535 нм (500-560).

Оптическую плотность калибратора измерьте против дистиллированной воды через 20 мин (комнатная температура) при длине волны 535 нм (500-560).

Расчёт концентрации билирубина в пробе (С) проведите по формуле:

Е _пробы

C = -------------- х 85,5мкмоль/л, где

Е _{калибр.}

Е пробы – оптическая плотность опытной пробы,

Е калибр. – оптическая плотность калибровочной пробы,

85,5 – концентрация билирубина в калибраторе, мкмоль/л.

Нормальные значения:

Общий билирубин – 8.5-20.5 мкмоль/л

Прямой билирубин – до 4,0 мкмоль/л

Результат анализа:

Вывод:

Дата: Подпись преподавателя: