4.4. Жидкостная хроматография

 

Жидкостная хроматография основана на тех же принципах, что и газовая, с той лишь разницей, что вместо газа носителя используется поток жидкости, не смешивающийся с неподвижной фазой, находящейся в колонке. При вводе пробы анализируемого материала в поток жидкого носителя в хроматографической колонке происходят процессы перераспределения веществ между подвижной и неподвижной фазами и смесь разделяется на индивидуальные соединения. На детекторе регистрируются пики, соответствующие индивидуальным веществам. Жидкостная хроматография позволяет анализировать практически любые смеси веществ, растворимые в том или ином растворителе.

Приборы для жидкостной хроматографии имеют ряд конструктивных особенностей. Жидкий носитель должен подаваться в хроматограф под определенным давлением вследствие того, что хроматографическая колонка обладает высоким сопротивлением потоку. Поэтому его подают с помощью поршневых насосов или мембранных устройств, работающих под давлением газа. Мембрана, разделяющая газ и жидкую фазу, нужна для предупреждения растворения газа. Для введения пробы применяют двухканальные краны или микрошприц. Колонки имеют небольшой диаметр (2–6 мм), длина колонок достигает 1 м. Их изготавливают из стекла, нержавеющей стали, тефлона. В качестве адсорбентов в жидкость–твердой хроматографии используют оксид алюминия, силикагель, активированный уголь, капрон, кизельгур и др.

В жидкость–жидкостной хроматографии носители жидкой фазы аналогичны носителям газовой хроматографии, неподвижная фаза не должна смешиваться с подвижной, ее наносят в виде раствора в летучем растворителе, удаляя последний током азота, либо смачивают ею носитель, которым набивают колонку. Подвижную фазу вводят в колонку и пропускают через нее для устранения неоднородности слоя носителя.

Детекторы жидкостной хроматографии имеют свои особенности. Для детектирования используют преломление светового луча, оптическое поглощение, электрохимические свойства раствора вещества в подвижной фазе, либо применяют химическое детектирование, проводя фотометрическую реакцию с веществом, либо испаряют жидкую фазу, и полученный поток паров детектируют методами, принятыми в газовой хроматографии. Наибольшее распространение получили рефрактометрические (чувствительность до 1·10^–4 единиц показателя преломления), спектрофотометрические (чувствительность 1·10^–2 единицы поглощения), адсорбционно-термометрические, использующие измерение теплоты адсорбции вещества (чувствительность 1·10^–5 моль). Сигнал детектора регистрируется далее самописцем. Кроме указанных типов детекторов применяют коллекторы фракций и полученные жидкие фракции анализируют подходящим методом.

Жидкостная хроматография – универсальный метод химического анализа, он обладает высокой чувствительностью, избирательностью и универсальностью. Важной особенностью метода (в отличие от газовой хроматографии) является возможность проведения процесса при комнатной температуре, что ценно при исследовании белков, аминокислот и других неустойчивых соединений.