1.5.3.Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

Определение чувствительности микроорганизмов – возбудителей инфекционных заболеваний человека к антибактериальным препаратам (АБП) приобретает все более важное значение в связи с появлением и широким распространением антибиотико – устойчивости у бактерий. Стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП были разработаны во второй половине 60-х – начале 70-х годов XX века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений. [21]

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

- обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии, для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам .

- обоснование эмпирической (проверенной) терапии отдельных нозологических формах инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов.

- осуществление наблюдения за распространением антибиотико – устойчивости в отдельных учреждениях или географических регионах.

- исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.

В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача – бактериолога.[21]

Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости. Исследованию по оценке чувствительности к антибиотикам подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.[12]

Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.[21]

По степени чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмы разделяют на три группы: чувствительные (S), промежуточные (I) и устойчивые (R). Есть два подхода к значению этих понятий. Клинический подход рассматривает оценку эффективности антибактериальной терапии. В соответствии с этим, к чувствительным относят штаммы возбудителя, рост которых в организме больного прекращается при введении обычных терапевтических доз антибиотика. К промежуточным относятся штаммы, для подавления, роста которых требуется назначение максимально допустимых доз антимикробного препарата. К устойчивым относят штаммы, для подавления, роста которых требуются очень высокие дозы антибактериального препарата, которые при данной концентрации могут привести к токсическому эффекту в организме. Микробиологический подход к разделению понятий основан на анализе концентраций антибиотика в питательной среде.[12]

Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной устойчивости. У микроорганизмов, проявляющих универсальную чувствительность каким – либо АБП, т.е. когда случаев устойчивости не описано (например, Streptococcus piogenes – все штаммы чувствительны к пенициллину), проводить определение чувствительности к этим препаратам в повседневной практике нецелесообразно. Современные стандартизированные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.[12]

Рассмотрим диско - диффузионный метод (ДДМ). Этот метод является простым, удобным и широко используемым при микробиологическом исследовании чувствительности. Он основан на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавления роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит минимальную концентрацию, подавляющую видимый рост исследуемого микроорганизма на плотной среде (МПК). В диско - диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск, пропитанный определенным количеством антибиотика, помещаются на поверхность инокулированного агара, чашка инкубируется в течении определенного времени, затем измеряются диаметры зон подавления роста вокруг дисков с антибиотиками. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско – диффузионный метод позволяет лишь косвенно о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или устойчивый).[21]

Для определения чувствительности ДДМ следует использовать только стандартизированные качественные диски. Необходимо строго соблюдать правила хранения и использования коммерческих дисков, для получения правильных результатов, в противном случае содержание в них антибиотиков может снизиться ниже допустимого уровня (прежде всего в результате увлажнения) еще до истечения срока годности. Долговременное хранение дисков с АБП осуществляют в герметичной упаковке в морозильной камере при температуре - 18ºС и ниже. Небольшие партии дисков, используемые в повседневной работе можно хранить в холодильнике при температуре + 4 - +8 ºС.[21]