Методические указания

1. Морфология анаэробных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.

Готовые препараты-мазки из чистых культур патогенных анаэробов окрасить по Граму, промикроскопировать. Препараты зарисовать. Обратить внимание на характер расположения спор, отношение к окраске.

2. Изучение особенностей роста культур анаэробов на различных питательных средах.

Демонстрация роста анаэробов на средах Виллиса-Хоббс, Китта-Тароцци, Вильсон-Блера, Цейсслера, на молоке.

3. Микробиологический диагноз анаэробных инфекций. Разбор методов диагностики столбняка. Посев исследуемого материала по способу Вейон-Виньяля, Фортнера, на среду Китта-Тароцци. Регистрация результатов посева материала, содержащего анаэробные микробы, макро- и микроскопия выросших культур.

Для выделения чистых культур анаэробов берется раневое отделяемое. Исследование начинается с предварительной микроскопии исходного материала. Для этого готовят мазки и окрашивают по Граму. Обратить внимание на наличие капсул. Препараты зарисовать.

Посев производится на регенерированную, то есть предварительно прогретую на кипящей водяное бане в течение 10-20 мин для освобождения от растворенного в ней кислорода, среду Китта-Тароцци..

Зарегистрировать результаты посева материала, содержащего анаэробные микроорганизмы. Приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и зарисовать.

5. Демонстрация препаратов, применяемых для профилактики и лечения анаэробных инфекций.

Рис. 1. Патогенные анаэробы Окраска по Граму	Рис.2. Анаэробы в раневом отделяемом Окраска по Граму	Рис.3. Выделенная культура анаэробов Окраска по Граму

Контрольные вопросы

1. Каковы основные биологические свойства анаэробных бактерий?

2. Какова роль анаэробных бактерий в патологии человека?

3. Какие заболевания вызывают анаэробные бактерии?

4. Каков механизм заражения при газовой гангрене?

5. Что является средой обитания анаэробных бактерий в естественных условиях?

6. Каковы основные морфологические, культуральные и биохимические особенности возбудителя столбняка?

7. Какова природа токсина столбнячной палочки и на что он действует?

8. Чем отличается картина столбняка у человека и у мелких лабораторных животных?

9. Что является средой обитания для столбнячной палочки?

10. Чем объясняется высокая обсемененность почвы столбнячной палочкой в Краснодарском крае?

11. Каковы основные морфологические и биологические свойства возбудителя ботулизма?

12. Какова природа токсина палочки ботулизма? Какие типы токсина продуцирует возбудитель и что поражает токсин?

13. Какие условия способствуют размножению возбудителя ботулизма и накоплению токсина в пищевом продукте?

14. Какой материал берется для исследования при подозрении на ботулизм?

15. Какие методы применяются для обнаружения токсина возбудителя ботулизма и определения его типа?

16. Какие продукты чаще всего являются причиной отравления при ботулизме?

17. Как осуществляется специфическая профилактика и лечение ботулизма? Какие препараты применяются для этой цели?

18. Что представляет собой протоксин?

19. Какова природа и структура столбнячного токсина?

20. Как активируется столбнячный токсин?

21. Что поражает столбнячный токсин?

22. Каковы функции тяжелой и легкой цепей столбнячного токсина?

23. Как продвигается столбнячный токсин к ядрам двигательных нервов?

24. Каков защитный уровень антитоксина против столбнячного токсина?

25. Как осуществляется специфическое лечение и специфическая профилактика столбняка?

26. Как обеспечивается формирование коллективного иммунитета против столбняка и какие препараты применяют для этой цели?

27. Что такое прогенитарные токсические комплексы, образуемые палочкой ботулизма?

28. Какие структурные варианты прогенитарных токсических комплексов Вы знаете? Каков их состав?

29. Как происходит активация ботулинического токсина?

30. Какая разница между протеолитическими и непротеолитическими вариантами возбудителя ботулизма? Каким образом осуществляется у них активация токсина?

31. В чем заключается механизм активации ботулинического токсина?

32. Какие функции выполняют нетоксические белки в составе белковых комплексов?

33. Каковы физико-химические свойства токсина ботулизма? Какие токсины, кроме нейротоксина, образует возбудитель ботулизма?

34. Ботулизм - интоксикация или токсикоинфекция? Что поражает ботулинический токсин?

35. Какой синдром чаще всего наблюдается у больных ботулизмом?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 10

Методы микробиологической диагностики ботулизма

А. Бактериологический (по классической схеме с последующей

биологической пробой – см. ниже).

Б. Биологический

Для обнаружения токсина и его типа в реакции нейтрализации.

Для обнаружения токсина двум мышам вводят исследуемый фильтрат в количестве 0,5 мл внутрибрюшинно, другим двум мышам вводят смесь, состоящую из 0,5 мл фильтрата и 0,2 мл смеси диагностических моновалентных противоботулинических сывороток типа А, В, С, Е (соединяют по 0,5 мл сыворотки каждого типа). Перед введением смесь испытуемого материала и сывороток выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут. Наблюдение за животными ведут в течение 4 дней. При наличии токсина погибают первые две мыши, остальные остаются живы.

При обнаружении токсина ставят развернутую реакцию нейтрализации для определения типа токсина. Для этого в 5 пробирок разливают по 2,4 мл испытуемого фильтрата и в каждую пробирку прибавляют по 0,6 мл сыворотки раздельно типа А, типа B, типа С и типа Е. В 5-ю пробирку прибавляют 0,6 мл физиологического раствора. Смесь после 30 минут выдерживания при комнатной температуре вводят внутрибрюшинно по 1 мл 2 мышам из каждой пробирки отдельными шприцами. Наблюдают за животными в течение 4 дней. При наличии токсина выживают мыши, получившие смесь токсина и гомологичной сыворотки, остальные мыши гибнут. Тип сыворотки, нейтрализующей токсин, указывает на типовую принадлежность токсина.