Методические указания

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств холерного и холероподобных вибрионов.

Приготовить препараты-мазки из чистой культуры водного вибриона, окрасить их по Граму, промикроскопировать и зарисовать. Изучить биохимические свойства холерного и холероподобных вибрионов по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда".

Рис.1. Вибрион Vibrio cholerae Окраска по Граму	Рис.2. Мазок из испражнений "холерного" больного. Окраска по Граму
Рис.3. Культура из пленки на пептонной воде. Окраска по Граму	Рис.4. Культура возбудителя кишечной инфекции на скошенном МПА. Окраска по Граму

2. Бактериологическое исследование испражнений холерного больного (разбор схемы).

Одну петлю испражнений засевают на пептонную воду в пробирке, другую петлю испражнений засевают на пластинку щелочного МПА так, чтобы получить изолированные колонии. Находят на щелочном МПА колонии, подозрительные на колонии холерного вибриона (прозрачные с серо-голубым оттенком), готовят из них препараты-мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. Проверяют подвижность в препарате «висячая капля». На сахарных средах определяют группу по Хейбергу, дифференцируют биовар. Ставят реакцию агглютинации на стекле вывыделенной культуры с холерной О-сывороткой и типовыми сыворотками Огава и Инаба. Проверяют холерогенность выделенной культуры.

Реакция агглютинации выделенной культуры вибриона с холерной о-сывороткой

1 – опыт; 2 – контроль

Предварительное заключение: ___________________________________________________

_____________________________________________________________________________

4. Исследование воды на наличие холерного вибриона (разбор методики).

Для исследования воды без предварительной фильтрации берут ее не менее 1 л, определяют рН, доводят ее насыщенным раствором соды до 7,6-7,8. Затем добавляют к 900 мл воды 100 мл основного раствора пептона (пептона 10 %, хлористого натрия 5 %, азотнокислого калия 1 % и углекислого натрия 20%). Засеянную 1%-ную пептонную воду (первая среда обогащения) разливают в колбы и флаконы по 250 мл и ставят в термостат на 5-8 часов. Дальнейшее исследование проводят по обычной схеме.

7. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (окончание). Регистрация результатов посева на среды «пестрого ряда», МПА, среду Пешкова. Окончательная идентификация возбудителя по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле.

Зарегистрировать результаты посева на среды «пестрого ряда», сделать предварительный вывод о родовой или видовой принадлежности возбудителя. С помощью соответствующих сывороток поставить реакцию агглютинации на стекле и определить серовар (серотип) возбудителя.

Регистрация результатов посева исследуемой культуры на среды "пестрого ряда"

Культура	Глю-коза	Лактоза	Маннит	Сахароза	Индол	Серо-водород	Среда Пешкова

Предварительное заключение о родовой или видовой принадлежности: _________________

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________