Контрольные вопросы
Какие микробиологические методы применяются для диагностики дифтерии?
Какой материал берется для исследования при подозрении на дифтерию и при обследовании на бактерионосительство?
Какие морфологические признаки присущи дифтерийной палочке?
Каковы тинкториальные особенности возбудителя дифтерии?
По каким признакам дифференцируют типы гравис, митис и интермедиус?
По каким биохимическим признакам отличают дифтерийную палочку от дифтероидов?
В чем заключается сущность пробы Пизу?
Какими методами и как определяют токсигенность возбудителя дифтерии?
Каковы пути и способы заражения дифтерией?
Какова роль дифтерийного батерионосительства в эпидемиологии дифтерии?
Как используют РПГА для обнаружения в сыворотке детей антитоксина?
Почему для микробиологической диагностики дифтерии необходимо выделение чистой культуры возбудителя и изучение его свойств?
Каковы морфологические, тинкториальные, кулътуральные и биохимические признаки листерий?
Какие методы микробиологической диагностики применяют при листериозе?
Как проводится бактериологическая и серологическая диагностика листериоза?
Какими факторами патогенности обладает возбудитель дифтерии?
Каковы способы и пути передачи возбудителя дифтерии?
Что поражает (какие органы и системы органов) дифтерийный токсин?
Каковы особенности генетического контроля синтеза токсина у возбудителя дифтерии?
Каковы природа и структура дифтерийного токсина?
Каков молекулярный механизм действия дифтерийного токсина и какой процесс в клетке он блокирует?
Каким образом осуществляется активация дифтерийного токсина?
Каким образом возможно превращение нетоксигенной дифтерийной бактерии и токсигенную?
Каковы особенности современной классификации дифтерийных бактерий, и какие критерии с этой целью используются?
Каковы морфологические, тинкториальные и кулътуральные признаки актиномицетов?
Какие методы микробиологической диагностики применяют при актиномикозов?
Как проводится бактериоскопический, бактериологическая и серологическая диагностика актиномикоза?
Какими факторами патогенности обладает возбудитель актиномикоза?
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИФТЕРИИ
А. Бактериологический
Материал: от больного – слизь и воспалительный налет из зева, носа, миндалин, носоглотки и т.д., на бактерионосительство – с лизь из зева и носа. |
||
С реда с теллуритом |
|
С ывороточная среда |
Микроскопия окраска по Граму, по Нейссеру и синькой Леффлера,
|
Свернутая с ыворотка |
Определение токсигенности преципитацией в агаре |
Биохимические свойства – среды с глюкозой, сахарозой, крахмалом, цистином, мочевиной |
Фаготипирование |
Определение серотипа |
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛИСТЕРИОЗА
А. Бактериоскопический
Имеет второстепенное значение, в связи с отсутствием морфологических особенностей. Применяют для изучения органов павших животных, а также новорожденных, погибших от листериоза. Готовят мазки-отпечатки, фиксируют смесью Никифорова, окрашивают по Романовскому-Гимзе или по Граму. Листерии имеют вид грамположительных коротких, умеренно толстых палочек, иногда нитей или кокков, расположенных одиночно или в форме частокола.
Б. Бактериологический (на ранних стадиях заболевания).
Материал для исследования на листерии — кровь, СМЖ, слизь из зева, пунктаты увеличенных лимфатических узлов, у новорождённых дополнительно — меконий, пупочная кровь; секционный материал (кусочки мозга, печени, селезёнки, лимфатические узлы). Посевы рекомендуют делать в первые 7-10 сут. болезни. Кровь и СМЖ засевают на плотные среды (глюкозный, глюкозо-печёночный или КА с глюкозой), в 100-200 мл глюкозного, глюкозно-печеночного или глюкозно-глицеринового бульона. Материал плотной консистенции эмульгируют в изотоническом растворе хлорида натрия и сеют на глицериновый или кровяной агар с теллурита калия или полимиксина (1-5 мкг / мл). Если изучаемый материал очень загрязнен посторонней микрофлорой, лучше сначала ввести его белым мышам или гвинейским свинкам и после их гибели печени и селезенки сделать мазки-отпечатки и посевы. Засеяны среды инкубируют при 37 ° С в течение 7 суток, ежедневно контролируя наличие роста путем бактериоскопии. Выросшие колонии отбирают для дальнейших исследований по наличию гемолитической активности (на средах с кровью) либо по способности приобретать сине-зелёную окраску при косом освещении. Идентификацию выделенных культур осуществляют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам. Листерии каталазоположительны, ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, салицин, не разлагаются маннит и глицерин. Свежие культуры дают положительную конъюнктивальную пробу в гвинейских свинок. Через 2 часа после внесения капли бульонной культуры листерий в конъюнктивальный мешок развивается гнойное воспаление конъюнктивы.
В. Серологический
Проводят со второй недели заболевания. С сывороткой крови больного и стандартным антигеном ставят РСК (диагностический титр 1:5 и выше). Применяют РНГА (для выявления хронического листериоза). AT сохраняются не менее 1 - 2лет после выздоровления (реакция может быть использована для ретроспективного анализа).
Г. Биологический
Для биологической диагностики листериоза лучше всего использовать белых мышей, иммуносупрессированных введением кортизона (4-5 мг в/м за 4 ч до заражения). После гибели животного (обычно на 2-6-е сутки) проводят посев материала из различных органов. Следует помнить, что листе-рии размножаются в мёртвых тканях, и для избежания диагностических ошибок часть патологического материала следует поместить в стерильные пробирки и хранить в течение 5 - 10 сут при температуре 4-6° С, а затем подвергнуть повторному исследованию.
Д. Ускоренная диагностика
ПЦР. Применяют тест-ситемы для определения вирулентных Listeria monocytogenes в клинических образцах, молоке и других пищевых продуктах. В качестве праймера ичпользуют последовательность генов листериолизина О. Чувствительность метода – 5-50 клеток в пробе.
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
АКТИНОМИКОЗА
А. Бактериоскопический
Бактериоскопию проводят для выявления друз. Наиболее распространённый метод лабораторной диагностики актиномицетов — обнаружение друз A. israelii в экссудате или гнойном отделяемом из очагов поражения. Последние могут достигать значительных размеров, образуя так называемые серные гранулы или тельца Боллингера размером в среднем 0,3-2 мм. Для поиска более мелких друз исследуемый материал (гнойное отделяемое, мокрота, биоптаты и СМЖ) помещают на предметное стекло в каплю 10-20% раствора КОН или NaOH, подогревают, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Друзы актиномицетов имеют плотную, каменистую консистенцию и скрипят как песок при надавливании на покровное стекло. Друзы актиномицетов также можно исследовать методом «раздавленной» капли либо в препаратах, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Граму. Они образованы агрегатами мицелия, имеющими вид округлых или овальных базофильных масс с эозинофильными включениями (очевидно, что это AT) на поверхности.
Б. Бактериологический
Патологический материал от больных, как правило, загрязнен посторонней микрофлорой. Для избавления от нее материал центрифугируют в растворе пенициллина и стрептомицина, затем отмывают от антибиотиков 0,85% раствором NaCl. Для освобождения от сопутствующей флоры можно внести в пробирку 50% раствор глицерина и выдержать 2-3 суток при 37 ° С. Для выделения чистых культур актиномицетов проводят посев на кровяной и сывороточный агары, среды Сабуро или Чапека, тиогликолевую среду, сердечно-мозговой МПА. Посевы актиномицетов инкубируют в аэробных и анаэробных условиях в течение 1 -2 нед. По периферии образующихся микроколоний имеются многочисленные ветвящиеся нити. Через 1-2 недели формируются плоские морщинистые или бугристые зрелые колонии. Идентификация выделенной культуры проводится по совокупности биологических свойств.
В. Серологический
Серологическая диагностика проводится редко. Используют реакции связывания комплемента и непрямой гемагглютинации. Антигеном служит актинолизат. Но обе реакции могут давать положительные результаты и при других заболеваниях (рак легких, тяжелые гнойные процессы). Несколько большее диагностическое значение имеют иммунологические тесты: реакция торможения миграции лейкоцитов и аллергическая проба с актинолизатом, а также количественное определение иммунокомпетентных клеток. Внутрикожная проба при висцеральном актиномикозе часто бывает отрицательный.
Г. Аллергический
Аллергическую пробу со стандартным корпускулярным антигеном, или антигеном, полученным путем кислотного гидролиза культуры листерий, ставят на 6-9-й день заболевания. Его вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл. Результат учитывают через 24-48 часов. Пробу считают положительной, если возникает гиперемия кожи и инфильтрат диаметром 1-2 см.