Мікроскопія. Методи мікроскопії
Мікроскопія - вивчення об'єктів з використанням мікроскопа. Поділяється на кілька видів: оптична мікроскопія, електронна мікроскопія, рентгенівська або рентгенівська лазерна мікроскопія, що відрізняються використанням електромагнітних променів з можливістю розгляду та одержання зображень мікроелементів речовини в залежності від роздільної здатності приладів (мікроскопів).
Оптична мікроскопія. Людське око є природну оптичну систему, що характеризується певним дозволом, тобто найменшою відстанню між елементами спостережуваного об'єкта (сприйманими як крапки або лінії), при якому вони ще можуть бути відрізнені один від іншого. Для нормального ока при видаленні від об'єкту на так звану відстань найкращого бачення (D = 250 мм), середньостатистичне нормальне дозволу становить 0,176 мм. Розміри мікроорганізмів, більшості рослинних і тваринних клітин, дрібних кристалів, деталей мікроструктури металів і сплавів і т. п. значно менше цієї величини. Для спостереження і вивчення подібних об'єктів і призначені мікроскопи різних типів. За допомогою мікроскопів визначають форму, розміри, будова і багато інших характеристик мікрооб'єктів.
Оптичний, або світловий мікроскоп використовує видиме світло, що проходить через прозорі об'єкти, або відбитий від непрозорих. Оптична система з декількох лінз дозволяє отримати удаване збільшене зображення зразка. Отримане зображення можна спостерігати оком (або обома очима, в бінокуляром), або фотографувати, передавати на відеокамеру для оцифровки. До складу сучасного мікроскопа зазвичай входить система підсвічування, столик для переміщення об'єкта (препарату), набори спеціальних об'єктивів і окулярів.
Були розроблені види мікроскопів, які дозволяють істотно розширити можливості звичайної оптичної мікроскопії:
Люмінесцентний мікроскоп
Поляризаційний мікроскоп
До 1950-х років працювали переважно в діапазоні видимого спектру світла. Око працює в оптичному діапазоні довжин хвиль. Оптичні мікроскопи не могли давати роздільної здатності менш напівперіоду хвилі опорного випромінювання (для видимого діапазону довжина хвиль 0,2-0,7 мкм, або 200-700 нм). Граничне збільшення оптичного мікроскопа - до 2000 разів. Подальше збільшення зображення недоцільно, оскільки не дозволяло виявити додаткових деталей структури вешества. Окремі частинки розміром приблизно до 0,15 мкм добре видно при збільшенні в 2000 разів. Більш дрібні частинки не відображають світлові промені і не видно під мікроскопом.
Оптичний, або світловий мікроскоп використовує видиме світло, що проходить через прозорі об'єкти, або відбитий від непрозорих. Оптична система з декількох лінз дозволяє отримати удаване збільшене зображення зразка. Отримане зображення можна спостерігати оком (або обома очима, в бінокуляром), або фотографувати, передавати на відеокамеру для оцифровки. До складу сучасного мікроскопа зазвичай входить система підсвічування, столик для переміщення об'єкта (препарату), набори спеціальних об'єктивів і окулярів.
Будова мікроскопу
Рисунок 1 - Біологічний мікроскоп серії "БІОЛАМ":
1 - основа; 2 - коробка з механізмом мікрометричного фокусування; 3 - мікрогвинт; 4 - предметний столик; 5 - гвинт для фокусування диска предметного столика; 6 - регулювальні гвинти; 7 - тубусотримач; 8 - макрогвинт; 9 - головка; 10 - тубус; 11 - гвинт для закріплення насадки; 12 - револьвер; 13 - гвинт фіксації револьвера; 14 – кронштейн конденсора; 15 - рукоятка конденсора; 16 - циліндрична гільза конденсора; 17 - гвинт; 18 - додаткова лінза (відкидна); 19-дзеркало. Оптична частина - об'єктив(и), окуляр(и), конденсор, дзеркало, діафрагма
2 Виготовлення тимчасового препарату
Мікроскопування об'єктів відбувається в променях, що проходять крізь препарат, тому він повинен бути оптично проникним. Для виготовлення найпростішого препарату використовують шкірочку цибулі. Обережно препарувальною голкою необхідно відокремити тоненьку шкірочку, що знаходиться між двома м'ясистими листками цибулини. На предметне скельце нанести краплю води. Потім обережно розмістити в ній невеличкий шматочок шкірочки цибулі і ретельно розправити. Накрити препарат накривним скельцем і він готовий до мікроскопування.
3 Техніка мікроскопування
3.1. Налагодіть освітлення вашого мікроскопа: направте за допомогою дзеркальця промінь світла через конденсор до об'єктива (для цього зніміть окуляр і візуально визначте промінчик від дзеркала в об'єктиві), поставте окуляр на місце і в полі мікроскопа повинне бути світле коло. Вставте окуляр.
3.2. Розмістіть препарат на предметному столику мікроскопа і зафіксуйте його фіксаторами. Поставте за допомогою револьверної голівки об'єктив з найменшим збільшенням і, використовуючи макрогвинт, наблизьте його приблизно на 1см до препарату. Спостерігаючи за об'єктом через окуляр, досягніть чіткого його зображення. Замалюйте фрагмент препарату шкірочки цибулі на малому збільшенні.
3.3. Розгляньте препарат на більшому збільшенні. Не зрушуючи тубус макрогвинтом, переведіть револьверну голівку з об'єктивом "40" на місце об'єктива "8". Використовуючи тільки мікрогвинт, добийтеся чіткого зображення. Замалюйте препарат на більшому збільшенні.