Биотрансформация ксенобиотиков проходит в печени.

Вопрос № 94,Основные принципы производства и продуценты витаминов.

-высокой биоактивностью обладают,не сами витамины, а их производные – коферменты. -открыты также коферменты, для которых не обнаружено витаминных аналогов. -коферментные формы на основе различных витаминов обладают ш.с.д.

-большинство витаминов выделяют из природных источников, либо синтезируют хим. путем. -с помощью БТ производят сложные по строению витамины В2, В12, β-каротин (провитамин А), РР и предшественники витамина Д (эргостерина).

-в синтезе витамина С (аскорбиновой к-ты) используют м/о селективные окислители d-сорбита в L-сорбозу.

Получение витамина В2 (рибофлавин).

- характерно функционирование в коэнзимных формах:флавиномононуклеотид (ФМН)

-флавинадениндинуклеотид (ФАД).

 

К источникам рибофлавина относятся:

-высшие растения, дрожжи, мицелиальные грибы.

Активным продуцентом рибофлавина являются культура дрожжеподобного гриба Eremotheciumashbyii и Ashbyagossipii.

Сверхсинтез рибофлавина можно получить, если действовать на дикиештаммы мутагенами, нарушающими механизм ретроингибирования синтеза витамина В2, флавиновыми нуклеотидами, а также изменением состава культуральной среды.

В состав среды для роста продуцентов рибофлавина входят:

-соевая мука, кукурузный экстракт, сахароза, карбонат кальция, хлорид натрия

-витамины

Перед подачей в ферментер среду стерилизуют иантисептиков во избежание ее инфицирования. По завершении процесса ферментации культуральную жидкость концентрируют

Получение витамина в12.

-регулирует углеводный и липидный обмен, участвует в метаболизме незаменимых аминокислот, пуриновых и пиримидиновых оснований, стимулирует образование гемоглобина, применяется для лечения злокачественной анемии, лучевой болезни, -микробио синтез в промышленном масштабе.Обнаружение витамин В12 как побочного продукта при производстве антибиотиков стимулировало поиск продуцентов этого витамина.

-продуценты пропионовокислые бактерии из рода Propionibacterium.

-мутанты и добавление в средупредшественника витамина В12 - 5,6 диметилбензимидазола (5,6 ДМБ) резко повышает продуктивность продуцента. Этому способствует также добавлениев питательные среды кукурузного и мясного экстракта, соевой муки, рыбной муки. Выращивание пропионовых бактерий производится периодическим методом в анаэробных условиях на среде с кукурузным экстрактом, глюкозой,солями кобальта и сульфатом аммония. Образующиеся кислоты нейтрализуются щелочью. Полученную массу сепарируют, стабилизируют нитритом натрия, охлаждают, нейтрализуют, коагулируют белки и фильтруют. Очищают на ионообменной смоле, кристаллизуют и проводят химическую очистку продукта. Далее следует получение различных лекарственных форм поливитаминных препаратов. Для увеличения производства витамина В12 перспективным является применение генной инженерии при получении гибридных штаммови использовании методов иммобилизации на полимерах.

Витамин В3 (пантотеновая кислота).

-тонкий органический синтез и микробиологический синтез с использованием иммобилизованных клеток бактерий, актиномицетов (основной метод).

Витамин РР. Используется биотехнологический метод, метод экстракции из микроорганизмов, обычно из пекарских дрожжей с добавлением предшественников. Используется штамм – Brevibacterium ammoniagenes.

Аскорбиновая кислота.

- бт с применением уксусно-кислых бактерий, проводящих реакциютрансформации d -сорбита в L-сорбозу. Для получения сорбозы культуру продуцента Gluconobacteroxydans выращивают в ферментерах периодического действия с мешалкой, барботером, усиленной аэрацией в течение 20-40 часов. Выход сорбозы достигает 98% от начального сорбита. Питательная среда: кукурузный дрожжевой экстракт до 20%. Сорбозу выделяют из культуральной жидкости.

Продуценты: Acetobacter, Erwinia ,Gluconobacter. Перспективно создание генноинженерных штаммов продуцентов.

Эргостерин (витамин Д2)

-основной компонент стеринов дрожжеподобных грибов рода Candida, использующих углеводы. Есть несколько вариантов выращивания дрожжей – продуцентов эргостерина.

Продуценты – это дрожжи, плесени, особенно Saccharomycescerevisiae.

Питательная среда должна содержать источники углерода, азота, фосфора.

Ферментация идет в аэробных условиях около 12-20 часов. Для получения кристаллического витамина Д2, биомассу гидролизуют, охлаждают, фильтруют, делают спиртовые экстракты, которые омыляют (обрабатывают щелочью), кристаллизуют, очищают, растворяя в эфире, удаляют эфир, а затем эргостерин облучают (УФ-облучение).

Источником получения эргостерина может служить и мицелий грибов, который остается как отход (побочный продукт) антибиотической промышленности.

β-каротин.Каротиноиды (политерпены)

-природный пигмент. Общий путь биосинтеза из изопреновых единиц. Источник – это высшие растения, водоросли, микроорганизмы. Получение - это тонкий органический синтез (хим. способ) и бт (использование мицелиальных грибов).

-пит.среда – кукурузно-соевая среда. Процесс получения многостадийный. β-каротин экстрагируется подсолнечным маслом ииспользуется в виде масляных

Витамин РР

-способ экстракции из микроорганизмов, обычно это пекарские дрожжи. В качестве штамма используется Brevibacterium ammoniagenes.

Убихиноны (коферменты Q).

-принимает участие в тканевом дыхании, окислительном фосфолирировании, в переносе электронов.

-получение бт на основе каллусных культур риса или опухолевой ткани.

Продуценты – бактерии, дрожжи идрожжеподобные микроорганизмы. Сухая масса грибов рода Candida содержит смесь убихинонов.

-применение убихинонов – при ишемической болезнисердца и при повышенных нагрузках.

Вопрос № 96. Технология получения гибридом.

Гибридо́ма

-гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния клеток двух видов: способных к образованию антител B-лимфоцитов, полученных из селезёнки иммунизированного животного и раковых клеток миеломы.

-описана методика, позволяющая получать клеточные линии (гибридомы), секретирующие отдельные разновидности антител (моноклональные антитела) с желаемой антигенной специфичностью. Открытие определило бурный прогресс в использовании антител для исследовательских целей, "гибридомная технология" -одно из направлений БТ

-бессмертные клеточные клоны продуцирующие антитела одной специфичности.

-получают при слиянии нормальных лимфоцитов, продуцирующих антитела, с подходящей опухолевой линией B- клеток.

-затем гибридомы отбирают в культуральной среде, неспособной поддерживать рост родительских клеток. Путем последовательных разведений и пересевов получают одиночные клоны, которые можно выращивать в роллерных культурах или в форме асцита в брюшной полости мышей.

-все молекулы иммуноглобулинов, продуцируемые определенной гибридомой, идентичны: они относятся к одному классу и одному аллотипу, имеют одинаковые вариабельные области

-клетки миеломы применяются для получения гибридом - линий клеток, производящих моноклональные антитела определенной специфичности. Поскольку эти клетки осуществляют эффективную секрецию рекомбинантных белков, хорошо изучены в отношении экспрессии в них соответствующих рекомбинантных генов, введенных с помощью трансфекции