Ферментативный гидролиз крахмала

 

Фермент амилаза, содержащийся в слюне, соке поджелудочной железы, крови, печени, мозге, катализирует гидролиз крахмала. Последовательно процесс расщепления крахмала можно представить следующим образом.

 

Реактивы: раствор слюны (свежую слюну разводят дистиллированной водой в 5 раз); 1 %-й раствор крахмала; раствор иода в иодиде калия (1 г KI растворяют в нескольких миллилитрах воды.В концентрированном растворе соли растворяют 1 г иода и разбавляют водой до 300 см³.); 5 %-й раствор гидроксида натрия; 5 %-й раствор сульфата меди.

Оборудование: пробирки; водяная баня.

Ход работы

Задание 1. Гидролиз крахмала.

1. В две пробирки налейте по 2 см³ 1 %-го раствора крахмала.

2. В одну пробирку долейте 1 см³ разведенной слюны, а в другую – 1 см³ воды (для контроля) и поставьте пробирки на 10 мин. в водяную баню или термостат, нагретые до 37 – 38 ^оС (внимательно следите за температурой, не допуская ее повышения).

3. По окончании реакции проанализируйте содержимое пробирок на содержание крахмала и мальтозы, как указано в заданиях 2 и 3.

Задание 2. Обнаружение продуктов гидролиза крахмала.

1. Из опытной и контрольной пробирок задания 1 отлейте в отдельные пробирки по 1 см³ растворов.

2. Добавьте в каждую пробирку по 1 капле раствора иода и перемешайте.

3. Сравните окраску полученных растворов.

Задание 3. Обнаружение мальтозы.

1. К оставшимся растворам опытной и контрольной пробирок добавьте по 1 капле раствора сульфата меди и по 5 капель раствора щелочи.

2. Содержимое пробирок перемешайте и поместите их в кипящую водяную баню.

3. Сравните окраску полученных растворов.

Оформление результатов.

Запишите схемы частичного и полного гидролиза крахмала. Объясните полученные результаты заданий 2 и 3.

ЛАБОРАТОРНАЯ  работа  №33

 

Обнаружение крахмала в продуктах питания

 

Крахмал основной резервный углевод  растений, представляет смесь двух полисахаридов, линейного (амилозы) и разветвленного (амилопектина), дает цветную реакцию с раствором иода в иодиде калия – окрашивается в темно–синий цвет. Крахмал белое аморфное вещество, не растворимое  в холодной воде, выделяют из картофеля.

Материалы и реактивы: крахмал; картофель; отварной рис; мука; яблоко; лимон; растительное масло; раствор иода в иодистом калии (1 г иодистого калия растворяют в нескольких миллилитрах воды, в концентрированном растворе соли растворяют 1 г иода и разбавляют водой до 300 см³) или спиртовой раствор иода; дистиллированная вода.

Оборудование:  пробирки; ступка с пестиком.

Ход работы

1. Исследуемые твердые продукты (картофель, отварной рис, яблоко, лимон) по отдельности разотрите до кашецообразного состояния в ступе.

2. В семь пронумерованных пробирок поместите по 0,5 –1 г растертых продуктов.

3. Во  все пробирки добавьте по 2 – 3 см³ дистиллированной воды и пробы тщательно перемешайте.

4. Добавьте в пробирки по 1 – 2 капли раствора иода.

5. Отметьте пробирки, в которых наблюдается синее окрашивание.

Оформление результатов

Оформите проведенные исследования в виде таблицы. Сделайте вывод о содержании крахмала в изученных продуктах.

№ пробирки	Исследуемый продукт	Наблюдаемая окраска	Содержание крахмала

ЛАБОРАТОРНАЯ  работа  №34

 

Количественное определение глюкозы

 

Глюкоза при нагревании с ортотолуидиновым реактивом дает зеленую окраску, интенсивность которой пропорциональна концентрации глюкозы.

Реактивы: ортотолуидиновый реактив, стандартный раствор глюкозы 1 мг/мл, раствор глюкозы неизвестной концентрации.

Оборудование: Спектрофотометр, пипетки, водяная баня, штатив, пробирки.

Ход работы

К 0,2 мл стандартного раствора глюкозы и 0,2 мл раствора с неизвестной концентрацией добавить по 2 мл ортотолуидинового реактива. Пробирки со смесью поместить в кипящую водяную баню на 8 минут. Пробирки вынуть, охладить под струей водопроводной воды до комнатной температуры.

Оптическую плотность раствора измеряют при длине волн 590 – 650 нм. Расчет ведут по формуле:

 

Сх =	Ех	* Сст
	Ест

 

 

где:

  С_х – концентрация глюкозы в исследуемом растворе (мг/мл);

  С_ст – концентрация глюкозы в стандартном растворе (мг/мл);

  Е_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

  Е_ст – оптическая плотность стандарта.