1.5. Иммуноблотинг.

Определение: выявление антител (антигенов) к определенным антигенам (антителам) возбудителя.

*Принцип метода:

1. Разделение антигенов с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

2. Перенос комплекса антигенов на полоску из нитроцеллюлозы. При этом разные антигены фиксируются в различных участках полоски.

3. Обработка иммунной сывороткой.

4. Обработка конъюгатом стафилококкового белка А с пероксидазой. Белок А, меченый ферментом адсорбируется только на комплексе антиген – антитело.

5. Добавление субстрата с индикатором.

6. Изменение цвета индикатора при расщеплении субстрата под действием фермента.

Таким образом, на нитроцеллюлозной полоске в месте, где произошло специфическое связывание антигенов и антител появляется видимая (окрашенная) полоса.

Существуют различные варианты метода, где вместо ферментной метки используются радиоактивные метки.

*Практическое применение: используется для изучения иммунных сывороток в научных целях и для серодиагностики инфекционных заболеваний, в частности СПИДа, и как самый высокочувствительный и точный метод.