2. Реакция кольцепреципитации

А) реакция термокольцепреципитации по Аскони;

Б) кольцевая проба Банга (выявление антител к бруцеллам в молоке).

Компоненты:

1. Исследуемый антиген – экстракт из шкуры животного, фильтраты патологического материала и т. д.

2. Известная преципитирующая специфическая сыворотка.

Реакция ставится в узких преципитационных пробирках. На сыворотку осторожно наслаивают антиген. При положительной реакции на границе соприкосновения двух жидкостей появляется мутнобелое кольцо.

Применяется:

* Для выявления сибиреязвенного антигена в шерсти, шкурах животных – реакция Асколи.

* Для обнаружения других возбудителей инфекционных болезней в патологическом материале от больного или в объектах внешней среды.

* В судебно – медицинской экспертизе для обнаружения видовой принадлежности белка крови, спермы и других биологических жидкостей.

Особенности: избыток антигенов не влияет на результат, т. к. взаимодействие компонентов постепенное.

3.2.3 Реакция микропреципитации.

Реакция микропреципитации – это разновидность реакции преципитации, которая применяется для выявления низких титров антител.

Используют нефилометрическую реакцию по определению оптической плотности или реакцию помутнения по Уанье (1955)

Достоинства: для скрининговых исследований.

3.2.4 Реакция диффузной преципитации в геле (рдп) или феномен иммунодиффузии.

Это реакция преципитации в геле, агаре, агарозе, коллоидном растворе крахмала, карбоксиметилцеллюлозе, полиакриламидном геле и т. д.

Реакция основана на разной скорости диффузии частиц – антигенов и антител в агаре: при встрече соответствующих антигенов и антител в зоне оптимальных концентраций образуются белые линии преципитата.

По технике постановки реакции преципитации в геле различают:

А) метод простой диффузии, при котором одно реагирующее вещество, в основном, антиген, диффундирует в агар, содержащий постоянную концентрацию другого реагирующего вещества (иммунную сыворотку);

Б) метод двойной диффузии, когда оба реагента, антиген и антитело, движутся навстречу друг другу через нейтральный слой агара, не содержащий ни одного реагента.

В настоящее время предложено большое количество различных вариантов и модификаций как первого, так и второго метода преципитации в агаре. Например:

• двойная радиальная иммунодиффузия по Утерлони (в слое агара вырезают 2 лунки, в одну из которых помещают раствор антигена, в другую – раствор антител; в результате миграции обоих реагентов навстречу друг другу в зоне оптимальной пропорции образуются видимые линии преципитации);

• простая радиальная иммунодиффузия по Манчини (1 – 2% раствор агара смешивают с антисывороткой в плоской посуде. После застывания агара вырезают лунки и заполняют объемом растворимого антигена, молекулы антигена диффундируют в гель и взаимодействуют с антителами, в результате образуются круговые линии преципитации; диаметр круга зависит от концентрации антигена в лунке, т. е. количественно определяют антиген).

Применяется для серодиагностики и сероидентификации инфекционных болезней, для количественного определения любых классов сывороточных иммуноглобулинов, для определения токсигенности коринебактерий дифтерии в тесте Иллека: на Агар в чашке Петри наносится полоска фильтровальной бумаги, смоченной диагностической противодифтерийной антитоксической сывороткой, на расстоянии 2 см бак. петлей высевается чистая культура дифтерийной палочки в виде бляшек, инкубируется; в случае токсигенности культуры диффундируемый экзотоксин с антисывороткой образует полосы или «усы» преципитации.

Преимущество метода в том, что он дает возможность сравнить антигенные компоненты сложных смесей и судить об их общности или различиях.