Кировская государственная медицинская академия

Кафедра микробиологии и вирусологии

Тема: ’’Реакция преципитации, ее варианты. Реакции флоккуляции и нейтрализации’’.

3. Тезисы изучаемого материала:

1. Реакция преципитации: история, определение, компоненты, механизм, применение.

Реакция преципитации (РП), от лат. praecipio – осаждать, предложена Краусом (1987) – это феномен образования видимого осадка (преципитата) или общего помутнения среды после взаимодействия растворимых коллоидных антигенов с антителами (тонкий иммунохимический анализ).

Компоненты:

1. Антиген – преципитиноген, мелкодисперсный, коллоидный, растворимый. Например, фильтраты бульонных культур микроорганизмов – преципитирующая сыворотка и т. д.

2. Антитело – преципитин. Титр преципитирующей сыворотки – наибольшее разведение сыворотки, при котором еще наблюдается образования преципитата.

Это объясняется тем, что в реакции преципитации участвуют мицеллы ( частицы) коллоидного раствора, величина которых во много раз меньше корпускулярных антигенов и которые для образования видимого преципитата требуют в 10 000 раз большего количества антител, чем бактериальные клетки, образующие агглютинат.

Механизм:

1 фаза: специфическая, невидимая, связывание антител с антигенами

(Аг – Ат).

2 фаза: неспецифическая, видимая, образование видимого осадка преципитата в присутствии электролита.

( Аг – АТ + Аг Аг2Ат …)

Отметить, что преципитат образуется при определенных соотношений концентраций антигенов и антител, например:

• при оптимальных пропорциях образуются крупные агрегаты;

• при избытке антигенов комплексы растворяются, что может влиять на отрицательный ложный результат

Практическое использование:

1. для обнаружения антигена с использованием известной преципитирующей сыворотки – сероидентификация.

2. Для выявления специфических антител в исследуемой сыворотке на основе применения определенных антигенов – серодиагностика.

Ввиду высокой чувствительности реакцию на практике используют:

• для обнаружения следовых количеств антигена или гаптена в исследуемом материале;

• для изучения антигенной структуры микробов;

• в судебной медицине с целью определения видовой принадлежности белков крови, спермы, слюны по диагностической преципитирующей сыворотке;

• для выявления фальсификации продуктов, т. е. для определения вида белков в пищевых продуктах по диагностической сыворотке;

• в биологии для выявления степени филогенетического родства различных видов животных и растений.

2. Варианты реакции преципитации.

1. Реакция преципитации в пробирках

(в жидкой среде или фазе)

Компоненты:

1. Исследуемый антиген – экстракт из патологического материала или культуры микроорганизма.

2. Известная преципитирующая специфическая сыворотка.

3. Физ. раствор.

Реакция ставится в узких преципитационных пробирках, т. к. медленно реагируют компоненты. Готовят разведения антигена, добавляют сыворотку. Инкубируют 2 часа в термостате, 18 – 20 часов при комнатной температуре. При оптимальном соотношении компонентов происходит образование хлопьев преципитата, оседающих в виде рыхлого осадка на дно пробирки. Применяется для сероидентификации возбудителей (редко проводят).