12.2. Определение hla-фенотипа

На мембране клеток организма присутствуют продукты генов всех локусов, размещенных на обеих нитях 6-й хромосомы. Это означает, что HLA-гены наследуются по кодоминантному типу, т. е. одну хро­мосому ребенок наследует от матери, а другую — от отца. Как уже упоминалось, совокупность генов, расположенных на одной хромо­соме, составляет гаплотип. Таким образом, у человека два гаплоти-па и каждая клетка организма несет на себе диплоидный набор ан­тигенов системы HLA, один из которых кодируется HLA-генами ма­тери, а другой — отца. Исключение составляют половые клетки (яйцеклетка и сперматозоид), каждая из которых содержит в своем ядре только по одному гаплотипу.

Антигены гистосовместимости. выявляемые на клетках конкрет­ного человека, составляют HLA-фенотип. Для его определения необ­ходимо произвести фенотипирование клеток индивида. Как прави­ло, "типируются" лимфоциты периферической крови. В данном слу­чае не известно, какие именно HLA-антигены каким из двух гаплотипов родителей кодируются. Чтобы это определить, необхо­димо произвести типирование родителей, после чего можно устано­вить гаплотипы обследуемого и, соответственно, его генотип — пос­ледовательность расположения генов на хромосоме. На практике HLA-фенотип записывают, соблюдая числовой порядок HLA-анти-генов, согласно номенклатуре. Например:

HLA-фенотип субъекта— Al,2; B5,12; DR2,5; DQ3,4.

143

праймеров и режимов амплификации выявить сразу несколько специфичностей, используя одну пробирку и одну дорожку на геле. Длительность определения — около 2,5—3 ч.

Как было сказано выше, для выявления классических антигенов системы HLA локусов А, В, С и DR используется серологическая ре­акция микролимфоцитотоксичности, в которой применяются специ­альные антисыворотки, содержащие антитела к указанным антиге­нам. Молекулярное же типирование позволяет с помощью метода ПЦР выявлять различные аллели HLA на уровне ДНК. Это дает воз­можность выявлять те аллели генов HLA класса И, которые трудно выявляются с помощью серологического типирования, либо вовсе не выявляются. Так, например, с помощью серологической техники в локусе DR выявлено 14 антигенов, а с помощью ДНК-типирования — более 100 аллелей.

Установление новых, реально функционирующих аллелей заста­вило пересмотреть ранее существовавшую номенклатуру HLA, и те­перь принято четырехзначное обозначение (например А0101 вместо А1). В тех же случаях, когда установлено несколько аллелей, кото­рые по прежним представлениям кодировали различные субтипы од­ного антигена (например в HLA-A2 было установлено 12 таких суб­типов), то теперь их обозначают как различные аллели, имеющие об­щие первые цифры. Например от HLA0201 до HLA0212 или от HLAB2701 до HLAB2707.

Вышесказанное прямо относится только к классу I HLA, где поли­морфной является только одна цепь. В классе II из-за возможного по­лиморфизма как бета, так и альфа генов, установленные аллели обо­значают в зависимости от цепи, несущей вариабельный участок ДНК, определяющий специфичности, например DQA1-0501 и DQB1-0501.

В настоящее время селекция донора и реципиента по HLA-анти-генам с использованием ДНК-типирования стала рутинным мето­дом в типирующих лабораториях трансплантационных центров. Данные последних лет показывают, что выживаемость трупного почечного аллотрансплантата в течение 1 года при подборе пары донор-реципиент с помощью ДНК-типирования составила 90%. В то же время при подборе пары с помощью серологического типиро­вания эта же цифра оказалась равной 68%.

Не менее важным является определение HLA-фенотипа с помощью ДНК-типирования при решении вопроса о спорном отцовстве. В этом довольно ответственном и деликатном вопросе использование ПЦР также повышает точность анализа.

Наконец, немаловажным является практическое применение ПЦР для идентификации ДНК микроорганизмов при проведении диагно­стики инфекционной патологии. Опыт, накопленный за последнее время, показывает огромные перспективы использования ПЦР в этой области.

Часть вторая