6. Используемые питательные среды для количественного и качественного анализа микроорганизмов

Мясопептонный агар (МПА)- Универсальная твердая питательная среда на натуральной основе для культивирования широкого спектра микроорганизмов. Предназначена для выращивания и изучения культурально-морфологических свойств микроорганизмов различных таксономических групп. На МПА выявляют бактерии хемотрофы. При приготовлении среды к готовому мясопептонному бульону (до стерилизации или после нее) добавляют 2-3% измельченного агар-агара и кипятят, помешивая, на слабом огне до полного расплавления агара. МПА можно варить в автоклаве или аппарате Коха. Готовую среду, если нужно, осветляют, фильтруют и стерилизуют 20 мин при 120° С.

Сусло-агар (СА)- применяют для первичного посева материала с целью выделить дрожжи или грибы. Состоит из 1 л пивного сусла и 18-20 г агара, рН 6,5-7. Стерилизация-при 112°С в течение 15 мин.

Среда Ваксмана- используется для выявления актиномицетов. Состав: (NH4)2SO4 – 0,2 г; KH2PO4 – 3 г; MgSO4×7H2O – 0,5 г; CaCl2×6H2O – 0,25г; FeSO4 ×7H2O – следы; сера (S) порошком – 10 г; дистиллированная вода- 1л.

Среда Гетчинсона- выявляет целлюлозорасщепляющие микроорганизмы. Состав (г/л): NaNO3 - 2,5; FeCl3 - 0,01; K2HPO4 - 1; MgSO4*7H2O - 0,3; NaCl - 0,1; CaCl2 - 0,1; pH среды доводят до 7,2, добавлением 20% - го раствора Na2CO3; дистиллированная вода; МПА.

Среда Эшби- выявляет азотобактер путем раскатывания комочков почвы. Состав (г): сахароза — 20,0; К2НР04 — 0,2; MgS04-7H20 — 0,2; NaCI — 0,2; FeS04 — 0,1; СаСОз — 5,0; вода дистиллированная — 1000 мл. В среду рекомендуется вносить смесь микроэлементов — 1 мл/л.

7. Учет численности микроорганизмов на плотных средах

Таблица 1

Учет микроорганизмов велся на 2-3 сутки инкубации.

1. Количественная и качественная оценка микроорганизмов на мпа

Разведение	Общее количество микро-организмов	Среднее количество колоний	Количество микроорганизмов в 1 г абсолютно сухой почвы (КОЕ/г)	Количество колоний доминирующих микроорганизмов	Доминирующие формы микроорганизмов на 1 г (КОЕ/г)	Доля доминирующих форм в общей численности
10-4	95	76	17,6*10^5	74	17,2*10^5	97,7%
	56

Количество микроорганизмов в 1 г абсолютно сухой почвы:

Общее количество микроорганизмов = общее кол-во колоний × разведение/ масса абсолютно сухой почвы

1) Общее количество микроорганизмов в 4-ом разведении = 76×10⁴/ 0,43 = 17,6*10^5

Количество микроорганизмов доминирующей формы в 1 г абсолютно сухой почвы:

1) Общее количество доминирующих микроорганизмов в 4-ом разведении = =74×10⁴/ 0,43 =17,2*10^5

Общее количество доминирующих микроорганизмов / общее количество микроорганизмов × 100%

1. Доля доминирующих форм в 4-ом разведении =17,2*10^5/17,6*10^5×100% =97,7%

Таблица 2

Культуральные и морфологические признаки доминирующих микроорганизмов на МПА

Культуральные признаки	Морфологические признаки	Предполагаемый возможный род, к которому можно отнести описываемый организм
Форма колонии: круглая Размер: 0,1 – 0,9мм Цвет: белый Блеск: матовый Поверхность: гладкая Край: ровный Структура: пленчатая Консистенция: маслянистая	Рис. 1 Увеличение: 1600 Форма клеток: слабо-изогнутые палочки Характер расположения: цепочечный Способность к спорообразованию: спорообразующие	Bacillus megaterium

Вывод: В почве были выявлены микроорганизмы рода Bacillus, что говорит о том, что почва обеднена подвижным азотом, поэтому Bacillus используют в качестве источника азота его органические соединения.

Таблица 3

Учет микроорганизмов велся на 2-3 сутки инкубации.