Культивирование актиномицетов и грибов

Для культивирования дрожжей, плесеней и актиноми­цетов используют различные питательные среды, как плотные, так и жидкие: среду Сабуро, мозговые среды, жидкое пивное сусло и др. Наибольшее применение по­лучила среда Сабуро. Она содержит пептон, глюкозу, агар-агар. Все эти компоненты растворяют в воде, уста­навливают pH 5—5,5 и стерилизуют в автоклаве. Тем­пература культивирования грибов несколько ниже, чем бактерий (22—29°С).

Колонии плесневых грибов на плотных питательных средах достигают 0,5—3—5 см; еще крупнее они на жид­ких средах. Поверхность колоний может быть бугристой, складчатой, иногда плоской, консистенция — рыхлой. Цвет колоний грибов весьма разнообразный: беловато­желтый, коричневый, оранжевый, красный, бурый, чер­ный, зеленоватый. На жидких питательных средах плесе­ни образуют серовато-беловатое войлокообразное спле­тение мицелия или густой конгломерат из пушистых хол­миков. В отличие от бактерий многие грибы не вызывают при росте помутнения среды.

Колонии дрожжей и дрожжеподобных грибов могут быть плоскими или куполообразными, гладкими, блестя­щими, иногда слегка исчерченными или складчато-бугри­стыми. Консистенция их сметанообразная с различными оттенками: беловато-желтоватые, коричневые, желтые и темные. Размеры колоний значительно меньше, чем у плесневых грибов. На жидких средах они растут сплош­ной пристеночной пленкой, дают рыхлый осадок или рав­номерное помутнение среды. Колонии актиномицет раз­личаются в зависимости от их вида и типа. Для получе­ния чистой культуры грибов к питательным средам добавляют различные вещества, подавляющие рост пос­торонней микрофлоры, например, антибиотики (пеницил­лин, стрептомицин и др.)* Используют также сочетание бычьей желчи, кристаллического фиолетового и стрепто­мицина, которые добавляют к среде Сабуро.

Культивирование спирохет и простейших

Спирохет всех видов можно выращивать на искусст­венных питательных средах. Основой питательной среды является сыворотка крови кролика или лошади, как цельная, так и разведенная физиологическим раствором в различных соотношениях. Иногда к сыворотке добавля­ют кусочки свернутого белка куриного яйца, почки или печени кролика, печени крупного рогатого скота, свежую цитратную кровь. Выращивание производят под слоем жидкого парафина или вазелина при pH среды 7,8—8,4. Оптимальная температура выращивания для трепонем 35°С, для лептоспир и боррелий 28—29⁰С. Наиболее лег­ко выделить и культивировать лептоспиры, питательной средой для которых может быть даже дистиллированная вода с 5—10% сыворотки кролика. В последние годы предложены сывороточные плотные питательные среды для культивирования лептоспир. Боррелии успешно куль­тивируют на более сложных питательных средах, содер­жащих до 50% сыворотки кролика или лошади и кусочки вареного белка куриного яйца. Трепонемы культивируют с трудом и число выделенных штаммов достигает только нескольких десятков во всем мире.

Простейшие выращиваются на искусственных пита­тельных средах, часто очень сложного состава. Они со­держат лошадиную сыворотку, печеночный экстракт, дефибринированную кровь, крахмал и другие ингредиен­ты. Дизентерийная амеба культивируется на среде Пав­ловой, состоящей из набора нескольких солей, дистилли­рованной воды, 0,5% лошадиной сыворотки с добавлени­ем крахмала. Балантидии выращивают на среде Нельсо­на, составной частью которой является раствор Рингера (10 частей) и содержимое слепой кишки свиньи (1 часть). Питательная среда употребляется после авто- клавирования в течение 15 мин. Культивирование лямб­лий проводят на питательной среде Карапетяна, имею­щей очень сложный состав. Лейшманий чаще культиви­руют на среде Нови, Мак Ниля и Николя (NNN), в со­став которой обязательно входит кровь кролика или ло­шади. Температура выращивания лейшманий 22—25°С. Лейшманий можно культивировать также на жидких пи­тательных средах и в культуре ткани. Трихомонады культивируют на среде Линча, TV и CPLM. Наиболее проста среда Линча, которая состоит из 10 мл 0,5% рас­твора хлорида натрия, 1 мл инактивированной сыворот­ки человека и 500 ЕД пенициллина.

Малярийные плазмодии и токсоплазмы не растут на искусственных питательных средах. Их культивируют в культуре ткани, курином эмбрионе и в организме вос­приимчивого животного.