Методы культивирования анаэробов

Для культивирования анаэробных микроорганизмов необходимо создание бескислородных условий, получе­ния которых можно достигнуть различными методами.

Физические методы основаны на создании вакуума в специальных аппаратах-анаэростатах. Иногда воздух в них заменяют каким-либо другим газом, например С0₂. Доступ кислорода в питательную среду можно затруд­нить, если культивировать анаэробов в глубине столбика сахарного агара или среды Вильсона — Блера, налитого в пробирки в расплавленном состоянии и остуженного до 43°С. По методу Вейона — Виньяля расплавленный и остуженный агар с посевным материалом набирают в стеклянные трубочки, которые запаивают с двух концов.

Химические методы заключаются в том, что при куль­тивировании исследуемого материала на плотных средах в эксикатор помещают химические вещества, например пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода. В жидкие питательные среды можно добавлять различные редуцирующие вещества: аскорбиновую или тиогликолевую кислоту.

Биологический метод основан на одновременном культивировании аэробов и анаэробов на плотных пита­тельных средах в чашках Петри, герметически закупо­ренных. Вначале кислород поглощается растущими аэро­бами, посеянными на одной половине среды, а затем на­чинается рост анаэробов, посев которых сделан на дру­гой половине.

Наиболее удобна для культивирования анаэробов специальная среда Тароцци. В нее входят сахарный мясо- пептокный бульон, который наливают в пробирки в ко­личестве 10—12 мл, и кусочки вареных паренхиматозных органов. Сверху среду заливают стерильным вазелино­вым маслом. Перед употреблением среду Тароцци кипя­тят на водяной бане для удаления растворенного в ней кислорода. Заметный рост анаэробов (помутнение) мо­жет наблюдаться через 48 ч и более в зависимости от ко­личества посевного материала.

Рост изолированных колоний анаэробов можно полу­чить при рассеве исследуемого материала по поверхнос­ти кровяно-сахарного агара, разлитого в чашки Петри. После посева чашки помещают в анаэростат. Исследуе­мый материал в убывающей концентрации засевают в агар высоким столбиком. Образовавшиеся отдельные ко­лонии анаэробов выделяют, распилив пробирку в месте роста микробов. Колонии анаэробов для получения зна­чительного количества биомассы отсеивают затем на сре­ду Тароцци. В качестве источника энергии для анаэробов используют глюкозу, добавление которой в питательную среду обязательно.

Культивирование микоплазм и l-форм

Микоплазмы обычно культивируют на плотных пита­тельных средах, содержащих сыворотку. Для некоторых из них разработаны методы культивирования на жидких питательных средах. Питательные среды должны обла­дать высокой осмотической концентрацией. Микоплазмы растут также на живых куриных эмбрионах и на средах, содержащих вместо сыворотки водные экстракты мелко измельченных куриных эмбрионов. Пересевы на жидкие среды производят, вырезая кусочки агара с соответству­ющей колонией. Микоплазмы на плотных питательных средах образуют колонии с уплотненным врастающим центром и нежным ажурным краем (рис. 22). Через 3—

Рис. 22. Вид колонии микоплазм на искус­ственной питательной среде.

5 дней инкубации при 37°С они могут достигать размера 1,5—2 мм, но чаще колонии настолько малы, что их труд­но увидеть невооруженным глазом. В жидкой среде дают равномерное помутнение.

L-формы культивируют на средах, пригодных для роста бактерий, из которых произошли эти формы. Если происхождение L-форм неизвестно, используют богатый питательными веществами 1—1,5% агар на мясной воде или триптическом переваре бычьего сердца, содержащих 20—25% сыворотки и 10% дрожжевого экстракта. Обыч­но к средам добавляют пенициллин. Некоторые L-формы сохраняют стабильность и при отсутствии пенициллина. L-формы при росте на плотных питательных средах об­разуют колонии двух типов, отличающиеся по величине и способности к реверсии.