Культивирование бактерий

Культивирование бактерий производят на искусствен­ных питательных средах, для приготовления которых мо­гут быть использованы различные естественные продук­ты: молоко, кровь, сыворотка, картофель, желток кури­ного яйца, мясо и др. Искусственные питательные среды различаются по составу, консистенции, назначению.

По составу эти среды могут быть простые: пеп-

тонная вода, мясо-пептонный бульон (МПБ), мясо-пеп- тонный агар (МПА), мясо-пептонный желатин (МПЖ) и сложные. Сложные среды готовят путем прибавления к простым крови, асцита, сыворотки.

Синтетические среды готовят из простых химических соединений, взятых в определенных сочетаниях. Их ис­пользуют обычно для изучения деталей обмена веществ у микробов или для получения свободных от посторонних веществ продуктов жизнедеятельности микробных куль­тур.

По консистенции питательные среды могут быть плотными, что достигают добавлением к жидким средам 2—2,5% агар-агара, представляющего собой по­лисахарид, содержащийся в морских водорослях. Плот­ные среды можно получить и при добавлении 2—3% же­латина.

Полужидкие среды готовят с добавлением 0,8—1,2% агар-агара. Широко применяются жидкие питательные среды.

По назначению питательные среды могут быть дифференциальными, элективными и индикаторными.

Дифференциальные среды позволяют отличать виды микробов друг от друга. Их широко используют при мик­робиологической диагностике инфекционных заболева­ний. Плотные дифференциально-диагностические среды Эндо, Левина, Плоскирева применяют для дифференциа­ции кишечной палочки от патогенных микробов семейст­ва кишечных: возбудителей дизентерии, брюшного тифа и паратифов. Принцип их изготовления заключается в добавлении к мясо-пептонному агару лактозы и различ­ных индикаторов, выявляющих в среде кислые продукты. Кишечная палочка, расщепляющая лактозу, образует окрашенные индикатором колонии: при использовании фуксина они красного цвета, а эозинметиленового сине­го — синие. Патогенные кишечные микробы, не разлага­ющие лактозу, растут в виде бесцветных колоний. Для изучения ферментативных, сахаролитических свойств ми­кробов широко используют также жидкие или полужид­кие питательные дифференциальные среды Гйсса. Они состоят из пептонной воды, для полужидких — добавля- ^Ют 0,5% агара, 0,3—1% какого-либо углевода (лактоза, глюкоза, мальтоза и пр.) и индикатора. В качестве инди­каторов используют кислый фуксин, обесцвеченный ед­ким натром (индикатор Андреде), бромтимолблау и др. При образовании кислых продуктов обмена в результате расщепления углеводов среда с индикатором Андреде из желтоватой становится красной, а бромтимолблау меня­ет цвет морской волны на желтый.

Для изучения протеолитических свойств хмикробов применяют среды, содержащие белки или продукты их расщепления (пептон), например среды с желатином или мясо-пептонный бульон. По образованию конеч­ных продуктов расщепления белков (индол, сероводород, аммиак) или разжижению желатина судят о наличии со­ответствующих ферментов.

Элективные среды обычно применяют для выделения микробов определенных видов из исследуемого материа­ла, содержащего разнообразную постороннюю микро­флору. В элективных средах создаются благоприятные условия для жизнедеятельности только определенного вида микроба. Например, элективной средой для холер­ного вибриона служит щелочной агар или щелочная пеп- тонная вода, в которой другие микроорганизмы не раз­множаются.

Возбудители брюшного тифа и паратифов выращи­ваются на среде Мюллера, так как эти бактерии менее чувствительны к соединениям тетратионата натрия, чем кишечная палочка. Возбудители дифтерии куль­тивируются на свернутой сыворотке Леффлера, посколь­ку они размножаются на этой среде быстрее, чем сопут­ствующая микрофлора зева.

Индикаторные среды используются для выявления культур микробов, рост которых вызывает хорошо види­мые внешние изменения среды, позволяющие судить о присутствии микробов. Например, анаэробы на среде Вильсона — Блера (висмутсульфит-агар) восстанавли­вают сернистый натрий. При его соединении с хлорным железом образуется сернистое железо, окрашивающее колонии в черный цвет.

В настоящее время многие питательные среды выпус­кают в виде готовых сухих сред-полуфабрикатов, содер­жащих все необходимые для жизнедеятельности микро­бов ингредиенты. Среды из сухого порошка готовят пу­тем добавления воды и кипячения. При необходимости их подвергают стерилизации.