2.3 Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика. Материалом для исследования являются мазки и смывы из ротоглотки, мокрота, соскобы с конъюнктивы, спинномозговая жидкость, кал, сыворотка крови, секционный материал. Используются вирусоскопический, вирусологический, серологический и молекулярно-генетический методы. Экспресс-диагностика аденовирусной инфекции включает иммунную электронную и люминесцентную микроскопию, иммуноферментный анализ. Выделение аденовирусов проводят при вирусологическом методе в культурах клеток с последующей индикацией по ЦПД, в РСК, ИФА, РИА и индикацией в РН и РТГА с эритроцитами белых крыс (серотипы 1, 2, 4, 6, 8-10, 13-15, 17, 19, 22, 24, 26, 27, 29, 30) или эритроцитами макак-резус, но не крыс (серотипы 3, 7, 11, 14, 16, 20, 21, 25, 28). Типы 12, 18 и 31 гемагглютинирующей активностью не обладают. Для серологической диагностики применяются РСК, РН, РТГА, РНГА, ИФА, РИА. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в парных сыворотках крови в 4 раза и более, причем вторую сыворотку берут на 18-20-й день болезни. При интерпретации результатов учитывается возможность наличия высоких анамнестических титров антител. При остром течении заболевания в сыворотке крови определяются Ig М, тогда как наличие Ig G свидетельствует о перенесенном в прошлом аденовирусном заболевании.

Диагностика: Для раннего подтверждения, проходящего в лаборатории, диагноза используют поиск вирусного антигена в эпителиальных клетках слизистой носоглотки с помощью иммунофлуоресцентного метода. Применяют так же и серологический метод (РСК с аденовирусным антигеном). Диагностическим считается увеличение титра антител в парных сыворотках в 4 и больше раз.

Лабораторную диагностику аденовирусной инфекции проводят с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования.

Исследуемые материалы: отделяемое, смывы и мазки из носа, зева, задней стенки глотки и конъюнктивы, испражнения, кровь, секреционный материал. Как правило, клинический исследуемый материал подвергают предварительной очистке и концентрации, при необходимости добавляют антибиотики.

Экспресс-методы. Служат для быстрого прямого обнаружения аденовирусов и их антигенов в исследуемых образцах, начиная с первых дней течения инфекции. Используют следующие методы: МИФ, ИФА, ЭМ, ИЭМ, ПЦР.

ПЦР является наиболее современным, но еще недостаточно доступным методом быстрого обнаружения любого серотипа аденовируса.

Вирусологический метод. Заключается в выявлении, изоляции и последующей идентификации выделенного аденовируса. Этот метод отличается большими затратами труда и длительностью по времени и доступен не для всех лабораторий. Его применяют, главным образом, для эпидемиологических и научных целей, а также при диагностике нозокомиальных инфекций.

Выделение вируса происходит путем заражения чувствительных культур клеток как первичных (например, почки эмбриона человека), так и перевиваемых линий клеток (HeLa, KR, Hep-2 и др.).

Идентификацию аденовирусов проводят путем определения их родовой специфичности с помощью РСК, МИФ или ИФа. Серотипы определяют в РТГА или реакции нейтрализации (рН) на культурах клеток, используя набор типоспецифических сывороток или моноклональных типоспецифических антител.

Серологический метод является самым доступным методом, применяемым в довольно поздние сроки течения инфекции или ретроспективно. Метод заключается в исследовании разных сывороток больных, взятых в начале болезни и через интервал в 2-4 недели. Для подтверждения диагноза необходима сероконверсия в виде 4-х кратного и более повышения титра антител. Используют РСК, ИФА, РТГА и РН.

В зависимости от применяемых диагностикумов определяют родовую или типовую специфичность антител в испытуемых сыворотках.

Культивирование. Хорошо размножаются в первично трипсинизированных и перевиваемых культурах клеток различного происхождения (НеLа, Нер-2, КВ, RH). Не культивируются на куриных эмбрионах. ЦПД в культуре клеток может проявляться: 1) лизисом клеток, 2) округлением клеток, появлением внутриядерных включений, отслаиванием клеток от стекла и друг от друга, но без клеточного лизиса, 3) опухолевой трансформацией клеток .