2 Приборы и материалы

Песчаная баня

Электроплитка

Фильтр

Дрожжи

Серная кислота 10 %

Гидроксид натрия 10 %

Гидроксид натрия 30 %

Сульфат меди 1%

Сульфат меди 7 %

Молибденовый реактив

3 Описание работы

В колбу помещают 1 г дрожжей, приливают 8 мл 10 % серной кислоты, закрывают пробкой, в которую вставлена в качестве холодильника трубка длиной 25 – 30 см, взбалты­вают и закрепляют в штативе под углом 45°.

Гидролиз проводят при нагревании около часа, считая от момента закипания. После окончания гидролиза жидкость охлаждают и фильтруют через складчатый фильтр. С фильт­ратом проводят следующие реакции.

1. Биуретовая реакция на полипептиды.

К пяти каплям гидролизата добавляют 10 капель 10 % раствора NaOH и 1 – 2 капли 1 % раствора сернокислой меди до появления сине-фиолетового окрашивания, что сви­детельствует о присутствии в пробе полипептидов.

2. Проба на пуриновые основания.

К десяти каплям гидролизата прибавляют одну каплю концентриро­ванного раствора аммиака для нейтрализации и пять капель 1 % раствора азотнокислого серебра. Постепенно образу­ется осадок серебряных соединений пуриновых оснований.

3. Качественная реакция на углевод (рибозу и дезоксирибозу).

Качественные реакции основаны на способности моносахаридов, имеющих свободный гликозидный гидроксил, восстанавливать металлы (медь, висмут, железо) в щелочной среде. При этом металлы восстанавливаются из окисной формы в закисную или (в случае закиси) до свободного состояния; сахара же дают различные продукты окисления.

Проба Троммера заключается в восстановлении гидроксида меди (II) в гидрооксид меди (I) в щелочной среде под влиянием рибозы и дезоксирибозы, присутствующих в гидролизате дрожжей:

CuSO₄ + 2NaOH Cu(OH)₂ + Na₂SO₄;

Рибоза рибоновая кислота + 2CuOH

Cu₂O + H₂O

К пяти каплям гидролизата добавляют пять капель 30 % гидроксида натрия и несколько капель 7 % рас­твора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидрата оксида меди (II) и красный осадок оксида меди (I).

4. Молибденовая проба на фосфорную кис­лоту. К пяти каплям гидролизата добавляют десять капель молибденового реактива, представляющего собой раствор молибденовокнелого аммония в азотной кислоте, и кипятят. При охлаждении пробирки под струей холодной водопровод­ной воды выпадает кристаллический осадок лимонно-желтого цвета, обусловленный образованием фосфорно-молибденово-кислого аммония.

4 Оформление результатов работы

Сформулируйте выводы по данной работе.

5 Контрольные вопросы

1. Классификация сложных белков.

2. Строение и функции нуклеопротеидов.

3. Каким образом можно подтвердить химический состав нуклеопротеидов?

3.2 Лабораторная работа 21. Бензидиновая проба на геминовую группировку гемоглобина

Хромопротеидами называются сложные белки, у которых простетической группой является окрашенное соединение не­белкового характера, например, гем, каротиноиды, флавины. Хромопротеиды широко распространены в природе и играют важную роль в окислительно-восстановительных процессах в клетке. Особенно распространенными являются хромопро­теиды геминовой природы. К ним относятся гемоглобин кро­ви, гемоглобин мышц, ферменты каталаза, пероксидаза, цитохромы и др.

При добавлении к разбавленному раствору крови раство­ра бензидина и перекиси водорода жидкость окраши­вается в синий или зеленый цвет. Реакция обусловлена способность гемоглобина катализировать реакцию окисления бензидина перекисью водорода в парахинондиимид, при этом жид­кость приобретает синюю окраску. При стоянии окраска жидкости переходит в красную.

Реакция очень чувствительна и служит для обнару­жения минимальных количеств крови в биологических объ­ектах.

1 Цель работы – провести качественную реакцию на гемопротеид – гемоглобин

2 Приборы и материалы

Раствор гемоглобина

Спиртовой раствор бензидина 0,2 %

Перекись водорода 3 %

3 Описание работы

К пяти каплям раствора гемоглобина добавляют 1 – 2 кап­ли 0,2 % спиртового раствора бензидина и 1 – 2 капли 3 % раствора перекиси водорода. Жидкость окрашивается в синий цвет.

4 Оформление результатов работы

Сформулируйте выводы по данной работе.

5 Контрольные вопросы

Строение и биологическая роль гемоглобина.