Кредит 2

Занятие 3

Тема: Лабораторный практикум «Обмен углеводов»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость количественного определения метаболитов углеводного обмена в биологических жидкостях

Задачи обучения:

• обучить методам определения глюкозы в биологических жидкостях

Основные вопросы темы:

1. Методика определения глюкозы в сыворотке крови

2. Методика определения глюкозы в моче

3. Схема проведения теста толерантности к глюкозе

4. Методика определения ПВК в моче

5. Понятие о гликозилированном гемоглобине. Диагностическое и прогностическое значение

6. Медицинское значение определения глюкозы и метаболитов ее катаболизма в биологических жидкостях

7. Оформление протоколов исследования

8. Обсуждение полученных результатов

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

8. Биохимия : Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

9. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

10. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. . - М. : Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

11. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

12. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

13. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

14. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: качество выполнения методов исследования, оценка практических навыков работы на приборах

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов для определения глюкозы, лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.

Качественные реакции на лактат

Мотивация. Работа дает возможность получить экс­периментальные доказательства обнаружения конечного продукта гликогенолиза и гликолиза лактата.

Принцип. Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реакция Уфельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленоватого цвета.

Ход работы. В пробирку наливают около 1 мл реактива Уффельмана (20 капель 1 % раствора фенола + 2 капли 1 % раствора хлорного железа) до появления фиолетового цвета. К раствору по каплям добавляют мышечный экст­ракт. При наличии молочной кислоты окраска переходит в желто-зеленую вследствие образования молочнокислого железа.

Вывод.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ

Мотивация. Знакомство с унифицированным методом количественного определения пировиноградной кислоты (ПВК) в моче необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний. За сутки с мочой выделяется 113,7-283,9 мкмоль/сут ПВК.

Реактивы. 2,5% спиртовой раствор КОН; 0,1% раствор 2,4- ДНФГ.

Принцип. ПВК при взаимодействии с 2,4-ДНФГ в щелочной среде образует 2,4-динитрофенилгидразоны ПВК желто-оранжевого цвета, интенсивность окрашивания которых пропорциональна концентрации ПВК.

Ход работы. Порядок выполнения работы со­гласно схеме:

Реактивы	Контроль	Опыт
Моча	-	1,0
Дистиллированная вода	1,0	-
2,5% спиртовой раствор КОН	1,0	1,0

Перемешивают одну минуту.

Реактивы	Контроль	Опыт
0,1% р-р 2,4-ДНФГ	0,5	0,5

Колориметрируют на ФЭКе против кон­троля. Кювета 5,0; синий светофильтр (490 нм).

Расчет производится по калибровочной кривой.

Клинико-диагностическое значение.

ПВК - важнейший интермедиат дихотомического рас­пада углеводов. Уровень ПВК - информативный показа­тель, отражающий степень насыщенности организма ви­тамином В_І. Резкое повышение концентрации ПВК отме­чается при мышечной работе и В₁ - витаминной недоста­точности. Кроме того, повышение содержания ПВК в сыво­ротке крови отмечается при гепатитах, сахарном диабете, сердечной недостаточности и некоторых других заболева­ниях.