- •2. Работа с едкими веществами
- •3. Работа со спиртовкой
- •4. Первая медицинская помощь пострадавшим
- •4.1.При термических ожогах:
- •4.2. При химических ожогах:
- •4.3. При поражениях электрическим током:
- •Биуретовая реакция.
- •Ксантопротеиновая реакция.
- •Реакция миллона.
- •Реакц ия адамкевича.
- •Реакция фоля.
- •Отчет по лабораторной работе «Цветные реакции на белки и аминокислоты»
- •Субстратная специфичность ферментов
- •Количественное определение активности амилазы мочи
- •Кредит 2
- •Качественные реакции на лактат
- •Cхема протоколирования полученных результатов по определению пвк в моче
- •Глюкозотолерантный тест
- •Определение глюкозы в крови
- •Определение содержания - и пре- липопротеинов сыворотки крови ту рбидиметрическим методом.
- •Xод работы.
- •Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью сухого реактива и диагностической полоски кетофан
- •Обнаружение кетоновых тел в моче с помощью сухого реактива
- •Обнаружение кетоновых тел с помощью диагностической полоски кетоФан
- •Клинико-диагностическое значение.
- •Качественные реакции на нормальные и патологические составные части желудочного сока.
- •Количественное определение кислотности желудочного сока
- •Клинико-диагностическое значение
- •Мочевая кислота набор реагентов для определения концентраций мочевой кислоты в биологических жидкостях знзиматическим колориметрическим методом без депротеинизаций
- •1.Физическое исследование мочи.
- •Количественное определение креатинина в моче
- •Протоколирования полученных результатов по определению креатинина в моче
- •Клинико-диагностическое значение
- •Протоколирования полученных результатов по определению гемоглобина в крови
- •Определенние активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
- •Количественное определение общего билирубина в сыворотке крови
- •Клинико-диагностическое значение
- •Протоколирования полученных результатов по определению общего билирубина в сыворотке крови
Определенние активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
Аланинаминотрансфераза (АдАТ) катализирует обратимый перенос аминогрупп с аланина на 2-кетоглутат.
СООН СООН
| АлАТ |
СН3 (СН2)2 -------------> СН3 (СН2)2
| | <------------- | |
Н – С –NН2 + С=О С=О + Н – С – NН2
| | | |
СООН СООН СООН СООН
аланин 2-кетоглутарат пируват глутамат
Мотивация. Знакомство с унифицированным методом определения активности АлАТ в сыворотке крови необходимо для диагностики и контроля за лечением ряда заболеваний (печени, сердца, мышц и т.д.). В сыворотке крови активность АлАТ в норме составляет 0,1 – 0,68 ммоль/Ч х Л).
Реактивы. 1. Субстратный раствор (1,2 г Nа2НРО4 б/в; 0,2 г КН2РО4; 0,04 г 2-кетоглутаровой кислоты; 1,78 Дα-аланина растворяют небольшими порциями 1 н раствором едкого натрия до получения смеси с рН 7,4 и доводят объем до 100 мл дистиллированной водой). 2. Раствор 2.4-динитрофенилгидразина растворяют в 100 мл 1 н раствора HCI. 3. 0,4 н раствор NaOH.
Принцип. В результате трансаминирования, происходящего под действием АлАТ, образуется пировиноградная кислота. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина энзиматический процесс останавливается и получается гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает окрашивание коричнево-красного цвета, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты.
Ход работы. Порядок выполнения работы согласно схеме:
Реактивы |
Опытная пробирка |
Контрольная пробирка |
Сыворотка крови |
0,1 |
0,1 |
Субстратный раствор |
0,5 |
- |
Пробирку помещают в термостат на 30 минут при 37оС.
Субстратный раствор |
- |
0,5 |
Раствор 2,4-ДНФГ |
0,5 |
0,5 |
Пробирки встряхивают и оставляют на 20 минут при комнатной температуре.
0,4 н раствор NаОН |
5,0 |
5,0 |
После тщательного перемешивания раствор оставляют при комнатной температуре на 10 минут для развития окраски. Оптическую плотность проб измеряют на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (500-560 нм) в кювете с шириной слоя 40 мм. Результаты сравнивают с аналогичными данными контрольных проб. Расчет производится по калибровочной кривой.