Мочевая кислота набор реагентов для определения концентраций мочевой кислоты в биологических жидкостях знзиматическим колориметрическим методом без депротеинизаций

Настоящий набор реагентов относится к серий «Витал –Европа », скомпонованной в соответствий с международными требованиями.

Принцип метода:

Содержащаяся в пробе мочевая кислота окисляется под действием фермента уриказы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. В присутствий пероксидазы перекись водорода окисляет хромогены с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорционально концентраций мочевой кислоты в пробе.

Мочевая кислота+2 Н₂О₂₊О₂ ̶ ^{уриказа}→аллантойн+СО₂₊Н₂О₂

2Н₂О₂₊ДХФС*+АПП** ̶ ^{переоксидаза} →(хинониминовый окрашенный продукт)+4Н₂О

Исследуемый материал:

Сыворотка или плазма крови, суточная моча. Мочу разведите в 10 раз физраствором.

Состав набора:

Реагент №1. Буфер

Фосфат……………………………………………..150ммоль/л

3,5-дихлоро-2-фенолсульфанат*………………………..2,5 ммоль/л

Детергенты

Реагент №2. Лиофилизат Конечные концентраций в рабочем растворе

4-аминоантипирин**……………………………………0,25ммоль/л

Уриказа…………………………………………………..300 ед/л

Аскорбатоксидаза…………………………………….250 ед/л

Пероксидаза………………………………………..250ед/л

Калибратор

Мочевая кислота………………………………………357мкмоль/л

Стабилизаторы

Аналитические характеристики набора:

Линейность…………………………………..до 20 мг/100 мл (1200мкмоль/л)

Значение коэффицента вариаций……………………………‹5 %

Время инкубаций………………………………….20- 25°С -10 мин

Чувствительность……………………………………40мкмоль/л

Стабильность окраски………………………..не менее 40 минут.

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность:

Срок хранения набора -6 месяцев при 2-8 °С. Дата изготовления, серия и каталожный номер набора указаны на упаковке.

Рабочий реагент:Растворите содержимое одного флакона №2 в одном флаконе №1. Для получения оптимальных результатов рекомендуется выдержать рабочий реагент после полного растворения лиофилизата при комнатной температуре 5-10мин. Плотно закрывайте флакон непосредственно после использования. Раствор стабилен не менее 30 дней при температуре 2-8°С

Калибратор готов к испльзованию.

АНАЛИЗ

Реактивы	Опытная проба	Калибровочная проба (мл)	Контрольная (холостая)проба (мл)
Рабочий реагент Калибратор Сыворотка/плазма крови или разведенная моча	2,0 - 0,05	2,0 0,05 -	2,0 - -

Содержимое пробирок перемешивают, и инкубируют не менее 10 минут при 20 -25 °С.

Пробы фотометирует против контрольной (холостой) пробы при длине волны 520 нм (490 нм, ФЭК)в кювете с толщиной поглощающего слоя 0,5 см (1,0см). Окраска стабильна не менее 40 минут после оканчания инкубаций.

Расчет:сыворатка/плазма крови: (Епр/Екал) ×357 мкмоль/л или (Епр/Екал) ×6мг/100 мл

моча: : (Епр/Екал) ×К ×3,57 мкмоль/л или (Епр/Екал) ×К ×600мг/л

где: Епр-экстинкция опытной пробы, Екал – экстинкция калибратора,К-количество суточной мочи, л,357 или 6,0 –концентрация мочевой кислоты в калибраторе в мкмоль/л или мг /100 мл соответсвенно.

Нормальные значения: - сыворатка/плазма крови: у женщин -142-339 мкмоль/л (2,4-5,7мг/100мл)

У мужчин -202 – 416 мкмоль/л (3,4-7,0мг/100мл);моча – 1,49-4,46 ммоль/24 часа (250-750мг/24часа)

Внимание:1. Аскорбиновая кислота до 570 мкмоль/л (10мг/100мл)и билирубин до 260 мкмоль/л (10мг/100мл) не влияют на правильность определения мочевая кислоты.2. Розовая окраска рабочего реагента является нормальной. Экстинкция контроля на реактивы не должны превышать Е=0,2(кювета – 1см,против воды). 3. При мытье посуды для анализа и кювет для измерения нельзя пользоваться моющими растворами, содержащими перекись водорода, а также серный(диэтиловый )эфир (например, смесью Никифорова)

.

КРЕДИТ 3

Занятие 6

Тема: Лабораторный практикум «Показатели водно-солевого обмена»

Цель: продемонстрировать клинико-диагностическую значимость экспресс – методов определения метаболитов патологических компонентов мочи

Задачи обучения:

• Обучить экспресс – методам определения патологических компонентов мочи

Основные вопросы темы:

1. Правила работы с диагностическими тест - полосками

2. Метод определения рН мочи

3. Методы определения белка в моче, глюкозы билирубина, эритроцитов и гемоглобина, уробилиногена

4. Оформление протоколов исследования

5. Обсуждение полученных результатов

Методы обучения и преподавания: проведение биохимических методик, оформление протоколов, обсуждение полученных результатов (TBL)

Литература

1. Биохимия : Учебник для мед. вузов / под ред. Е.С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп., 4-е изд. - М. : ГЭОТАР-МЕД, 2009,2008, 2007. - 768 с. : ил.

2. Биохимия с упражнениями и задачами : учеб. для вузов / ред. Е. С. Северин. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2008. - 384 с. : ил.

3. Березов Т.Т. Биологическая химия : учебник / Т. Т. Березов, Б. Ф. Коровкин. - 3-е изд., стереотип. . - М. : Медицина, 2008. - 704 с. : ил.

4. Николаев А.Я. Биологическая химия : учебник / А. Я. Николаев. - 3-е изд, перераб. и доп. - М. : Мед. информ. агентство, 2007. - 568 с.

5. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии : Учеб. пособие для вузов / Зубаиров, Д. М., Тимербаев В.Н., Давыдов В.С. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005.

6. Тапбергенов С.О. Медицинская биохимия.- Астана, 2001.

7. Шарманов Т.Ш., Плешкова С.М. Метаболические основы питания с курсом общей биохимии – Алматы, 1998

Контроль: качество выполнения методов исследования, оценка практических навыков

Оборудование и оснащение:

Оборудование: ФЭК АР – 101, ФЭК - 02, термостат ТСО 1/80, водяная баня, мойка ультразвуковая, рН-метр 150м, рН-метр С830Р, спектрофотометр, полуавтоматический/автоматический биохимический анализатор, весы лабораторные SPU 401,торсионные и аналитические весы, центрифуги, дистиллятор АДЭ – 5, компьютеры.

Оснащение: наборы химических реактивов (тест-полоски), лабораторная химическая посуда, штативы, компьютерные анимации, тестовые задания, ситуационные задачи.

Моча – биологическая жидкость, вырабатываемая почками. С мочой из организма удаляются конечные продукты обмена веществ (шлаки), избыток воды и солей, токсичные вещества, поступающие в организм извне или образующиеся в ходе метаболизма. Образование и отделение мочи является составной частью поддержания гомеостаза организма.

Мотивация. Биохимический анализ мочи дает представление о функциональном состоянии почек, процессах обмена веществ в различных органах и организме в целом, способствует выяснению характера патологического процесса, установлению патогенеза и прогноза заболевания, позволяет судить об эффективности проводимого лечения.