Лабораторные работы для выполнения на практических занятиях

Раздел VI. Биохимия крови.

Тема 6.1. Белки и ферменты сыворотки крови. Определение концентрации белков сыворотки крови биуретовым методом.

Принцип метода. Биуретовый метод относится к колориметрическим методам анализа и основан на цветной биуретовой реакции.

Ход определения. Взять в пробирку 0,2 мл исследуемой сыворотки, добавить 4,8 мл дистиллированной воды, перемешать. К 3 мл полученного раствора добавить 3 мл биуретового реактива, смешать. Через 30 минут определить экстинкцию полученного раствора против контроля (3 мл дистиллированной воды + 3 мл биуретового реактива) λ=540. Данные для построения калибровочной кривой:

Содержание белка	Оптическая плотность
7,80 5,80 3,95 2,96 1,975 1,46	0,303 0,226 0,150 0,113 0,076 0,057

Нормальное содержание белка в сыворотке крови взрослых людей 65-85 г/л (6,5 – 8,5 %), у детей до 6 лет – 56-58 г/л (5,6 – 8,5 %).

Лабораторные работы для выполнения на практических занятиях

Раздел VII. Биотрансформация лекарственных препаратов.

Тема 7.1. Поступление и распределение лекарственных препаратов в организме

 

Определение количества аскорбиновой кислоты в моче

Принцип метода Витамин С способен восстанавливать 2,6- дихлорфенолгендофенол, который в кислой среде имеет красную окраску, а при при восстановлении обесцвечивается; в щелочной окрашен в синий цвет. Для предохранения витамина С от разрушения исследование ведется в кислой среде.

Ход работы В две колбы налить по 10 мл исследуемой мочи, 10 мл дистиллированной воды и 1 мл концентрированной уксусной кислоты. Содержимое одной колбы оттитровать (на белом фоне) 2,6 — дихлорфенолиндофенола до появления слабо розового окрашивания, удерживающегося 30 секунд. Вторая колба служит для сравнения окраски.

Расчет: Х = М х 10

  где х – количество аскорбиновой кислоты в суточном количестве мочи;

М– количество мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола пошедшего на титрование;

1 мл 0,001Н раствора 2,6 — дихлорфенолиндофенола соответствует

0,088 мг аскорбиновой кислоты.

1500 — суточное количество мочи;

суточная экскреция аскорбиновой кислоты у здорового человека при обычных условиях составляет 20-30 мг, т.е. 113,55-170,33 мк моль/сутки

 

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел VII. Биотрансформация лекарственных препаратов.

Тема 7.2. Рецепция лекарственных препаратов, их превращение

в организме

Выявление ацетилирования (инактивации) гидразида

изоникотиновой кислоты (ГИНК) в организме

Принцип метода основан на выявлении свободной формы ГИНК, которая с метаванадатом аммония в кислой среде дает комплексное соединение коричнево-красного цвета. Разница в окраске между контрольной и опытной мочой указывает на степень ацетилирования ГИНК в организме.

Ход работы. Мочу разводят в 20 раз дистиллированной водой. В две пробирки вносят по 1 мл разведенной мочи; в одну из них (для определения общей ГИНК, т.е. суммы свободной и ацетилированной форм препарата) добавляют 1 мл раствора соляной кислоты, а во вторую (для выявления свободной ГИНК) — 1 мл дистиллированной воды.

Первую пробирку закрывают пробкой и ставят на 20 мин на кипящую водяную баню после чего охлаждают под струей водопроводной воды. В обе пробирки приливают по 2 мл реактива метаванадата аммония и отмечают разницу в окрашивании исследуемых проб мочи.

Оформление работы По разнице в окраске проб мочи дать примерную оценку степени ацетилирования ГИНК в организме и указать на значение этой реакции для практики.

Практическое значение работы. Реакция N- ацетилирования ГИНК осуществляется специальной ацетилтрасферазой, содержащейся в различных тканях организма. В зависимости от активности этого фермента у разных людей их делят на быстрых и медленных «инактиваторов» ацетиляторов ГИНК, что имеет значение не только для практической фармакогенетики, но и для рациональной терапии. По степени ацетилирования ГИНК устанавливается эффективная индивидуальная доза препарата для конкретного больного.

Учебно-методическое и информационное обеспечение дисциплины