Раздел IV. Обмен азотсодержащих соединений.
Тема 4.5. Обмен фенилаланина, тирозина, аспарагиновой,
глутаминовой кислот, валина, лейцина и изолейцина.
Качественная реакция на фенилпировиноградную кислоту.
Принцип метода. Фенилпировиноградная кислота образует с ионами 3-валентного железа комплексное соединение, окрашенное в сине-зеленый цвет.
Ход определения. К 2 мл свежепрофильтрованной мочи приливают 8-10 капель 10% раствора FeCl3. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты через 30-60 секунд появляется сине-зеленое окрашивание, которое постепенно исчезает (через 5-30 минут в зависимости от концентрации фенилпировиноградной кислоты).
Клинико-диагностическое значение. Концентрация фенил-пировиноградной кислоты повышается при врожденном дефекте фенилаланингидроксилазы. Накопление фенилпировиноградной кислоты в крови и тканях приводит к нарушению нормального развития мозга и развития фенилпировиноградной олигофрении.
Лабораторные работы для выполнения на практических занятиях
Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.
Тема 5.1. Общая витаминология. Обмен и функции витаминов в1, в2, в3 Диазореакция на тиамин (витамин в1)
Недостаток тиамина в пище вызывает заболевание бери-бери, связанное с поражениями нервной системы, сердечно-сосудистой системы и желудочно-кишечного тракта.
Биологическая роль тиамина хорошо известна – в виде тиаминпирофосфата он выполняет коферментные функции в реакциях декарбоксилирования α-кетокислот и в транскетолазной реакции.
Принцип метода. Раствор тиамина при добавлении к нему деазореактива и щелочи окрашивается в оранжевый или красный цвет вследствие образования сложного соединения тиамина с диазобензосульфокислотой.
Ход определения. К 5 каплям 1%-ного раствора сульфаниловой кислоты прибавляют 5 капель 5%-ного раствора нитрата натрия, получают диазореактив. К диазореактиву прибавляют небольшое количество порошка тиамина и 5-7 капель 10%-ного раствора карбоната натрия. Жидкость окрашивается в оранжевый или красный цвет.
Реакция восстановления рибофлавина (витамин в2)
Принцип метода. Рибофлавин обладает окислительно-восстановительными свойствами. Физиологическая роль витамина В2 выяснилась, когда было установлено, что рибофлавин входит в состав коферментов ФАД и ФМН, являющихся простетической группой ряда ферментов, относящихся к классу оксидоредуктаз.
Реакция обусловлена восстановлением рибофлавина выделяющимся моноводородом сначала в родофлавин (промежуточное соединение красного цвета), а затем в бесцветную лейкоформу:
рибофлавин (окисленная форма) рибофлавин (восстановленная форма)
Ход определения. В пробирку наливают 10 капель взвеси рибофлавина в воде, добавляют 5 капель концентрированной соляной кислоты и опускают гранулу металлического цинка. Выделяющийся в ходе реакции водород взаимодействует с рибофлавином: раствор приобретает постепенно розовую окраску, затем обесцвечивается.