10

Занятие. 1. Иммунодиагностика и аллергодиагностика

Цель иммунодиагностики – идентификация нарушенного звена иммунной системы, от которого зависит развитие данного заболевания.

Иммунограмма – набор тестов, позволяющих оценить звенья иммунной системы.

Выделяют четыре группы заболеваний иммунной системы, при которых показано иммунологическое обследование:

• иммунодефициты;

• аутоиммунные заболевания;

• аллергические заболевания;

• лимфопролиферативные заболевания.

Наибольшее значение иммунодиагностика имеет при иммунодефицитах, которые подразделяют на первичные и вторичные.

В соответствии с российскими рекомендациями (Р.В. Петров, Б.В. Пинегин, 1984, 2014 гг) все методы иммунодиагностики разделены на тесты I и II уровня. Тесты I уровня направлены на идентификацию грубых дефектов иммунной системы и позволяют осуществить диагностику основных первичных иммунодефицитов. Тесты II предназначены для углубленного изучения функционального состояния иммунной системы и применяются для выявления причин вторичной иммунной недостаточности. При этом их объем для каждого конкретного случая должен быть строго индивидуален.

Диагностика нарушений фагоцитоза

Фагоцитоз – комплекс клеточных реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма корпускулярных частиц размером более 0,5 мкм. Процесс фагоцитоза состоит из следующих стадий: хемотаксис, адгезия, поглощение, киллинг и переваривание объекта.

Для оценки хемотаксиса определяют рецепторы на поверхности фагоцитов к хемокинам (ИЛ8).

Для оценки адгезивных свойств определяют молекулы адгезии на поверхности фагоцитов с помощью моноклональных АТ (CD18, CD11a, CD11b, CD11c, CD62L, CD62E) методом проточной цитометрии.

Для оценки стадии поглощения выявляют процент нейтрофилов, способных поглощать корпускулярные антигены. В качестве объекта фагоцитоза (тест система) используют бактерии, дрожжевые грибы или синтетические частицы. Метод исследования: микроскопический.

Одним из распространенных методов оценки стадии переваривания является НСТ-тест.

НСТ-тест основан на способности частиц нитросинего тетразолия, поглощенных нейтрофилом, менять окраску под действием активных форм кислорода. Тест выявляет процент нейтрофилов с активными формами кислорода. Метод исследования: микроскопический. Норма: 4-10%. НСТ-тест повышен при острых бактериальных инфекциях.

НСТ-тест стимулированный (фагоцитарный резерв) отражает потенциальную способность нейтрофилов продуцировать активные формы кислорода в ответ на антигенное раздражение. Норма (фагоцитарный резерв) 2,4-3,5.

Снижение показателей фагоцитоза отмечается при миелолейкозе, сахарном диабете, иммуносупрессивной терапии, сепсисе, может проявляться рецидивирующими гнойно-воспалительными процессами, пиогенными инфекциями кожи.

Диагностика нарушений клеточного звена. (Фенотипирование лимфоцитов)

Согласно рекомендациям ВОЗ оценка популяционного состава лимфоцитов имеет диагностическое значение при первичных и вторичных иммунодефицитах, лимфопролиферативных заболеваниях и ВИЧ-инфекции.

Под световым микроскопом все лимфоциты выглядят одинаково, однако их можно отличить по антигенам клеточной поверхности, их обозначают CD-молекулами (СD1, СD2, СDЗ и т.д. до СD130) и выявляют с помощью моноклональных антител. Набор антигенов зависит от типа клеток и их функций. В соответствии с общепринятой в мире СD-кластерной классификацией маркером всех Т-лимфоцитов считают CD3, маркером Т-хелперов CD4, маркером Т-киллеров/цитотоксических CD8 и т.д.

Метод исследования: проточная цитофлуориметрия с использованием меченых флуорохромными красителями моноклональных антител к специфическим поверхностным маркерам этих клеток и последующей автоматической регистрацией.

Т-лимфоциты (CD3). Норма – 55-80% (0,80-2,00*10⁹/л)

Уровень CD3⁺ повышен – начальный период острого инфекционно-воспалительного процесса (чаще вирусной этиологии).

Уровень CD3⁺ снижен – первичные и вторичные иммунодефициты с наруше­нием Т-клеточного звена иммунитета;

Активированные Т-лимфоциты (СD25, НLA-DR). Норма – 3-12%.

Активационные маркеры – CD25, НLA-DR. появляются на Т-лимфоцитах, находящихся в стадии активации и могут быть использованы для диагностики, оценки активности иммунопатологических заболеваний, мониторинга лечения.

Уровень CD3⁺CD25⁺, CD3⁺НLA-DR⁺ повышен – активация иммунного ответа: острый или хронический воспалительный процесс.

Уровень CD3⁺CD25⁺, CD3⁺НLA-DR⁺ снижен – иммунодефициты с нарушением Т-клеточного звена иммунитета.

Т-хелперы (CD3CD4). Норма – 31-49% (0,60-1,60*10⁹/л)

Уровень CD3⁺CD4⁺ повышен – острый инфекционно-воспалительный процесс, обострение аллергических и аутоиммунных заболеваний.

Уровень CD3⁺CD4⁺ снижен – врожденные и приобретенные иммунодефициты.

Т-цитотоксические (Т-киллеры) (CD3CD8) Норма – 12-30% (0,45-0,85*10⁹/л)

Уровень CD3⁺CD8⁺ повышен – инфекции, вызванные внутриклеточными паразитами (вирусы, бактерии, грибы, простейшие).

Уровень CD3⁺CD8⁺ снижен – первичные и вторичные иммунодефициты, прогрессирующие злокачественные новообразования, длительное лечение цитостатиками, гомонами, иммунодепрессантами.

Иммунорегуляторный индекс

При некоторых заболеваниях диагностическое и прогностическое значение имеет соотношение CD4/CD8 или иммунологический индекс (ИРИ). Норма: 1,2-2,5.

CD4/CD8 (ИРИ) повышен –аутоиммунные заболевания, острый Т-лимфобластный лейкоз, тимома.

CD4/CD8 (ИРИ) снижен – вирусные инфекции, хронические заболевания, опухоли. Величина ИРИ менее 1 косвенно соответствует иммунодефициту.

Натуральные киллеры (НK-клетки, CD16 CD56)

НK-клетки – большие гранулярные лимфоциты, лизирующие клетки - мишени, инфицированные вирусами, внутриклеточными возбудителями, а также опухолевые клетки, без специфического распознавания, необходимого для Т-киллеров.

Уровень НK-клеток (CD3^+-CD16⁺CD56⁺) повышен – острый воспалительный процесс, бронхиальная астма, злокачественные новообразования, лейкоз.

Уровень НK-клеток (CD3^-CD16⁺CD56⁺) снижен – врожденные иммунодефициты, аутоиммунные заболевания, опухоли, стресс, прием цитостатиков и кортикосероидов.

НКТ-клетки (CD3CD16CD56)

НKТ-клетки имеют рецепторы, как НK-клеток, так и Т-лимфоцитов. Осуществляют регуляторную функцию, синтезируя цитокины.

Уровень (CD3⁺ CD16⁺ CD56⁺) повышен – при острых тяжелых воспалительных процессах, онкологических заболеваниях.

Уровень (CD3⁺ CD16⁺ CD56⁺) снижен – при аутоиммунных заболеваниях.

В-лимфоциты (CD19,CD20)

Уровень СD19⁺,CD20⁺ повышен – бактериальные и паразитарные инфекции, хронический В-лимфолейкоз, аутоиммунные заболевания (СКВ, ревматоидный артрит); бронхиальная астма.

Уровень СD19⁺,CD20⁺ снижен – гипо- и агаммаглобулинемии (врожденные и приобретенные); Т-лимфолейкозы, спленэктомия, прием иммунодепрессантов.

Диагностика нарушений синтеза иммуноглобулинов (Тесты I уровня)

Определение содержания иммуноглобулинов важно при диагностике и клиническом мониторинге врожденных иммунодефицитов, моноклональных гаммапатий, инфекций и аутоиммунных заболеваний. Методы определения иммуноглобулинов: радиальная иммунодиффузия по Манчини, нефелометрия. Уровень IgE определяют методом ИФА.

IgM (Норма 0,60-4,00 г/л). Уменьшение отмечается при гипогаммаглобулинемии, повышение – при остром воспалительном инфекционном процессе.

IgG (Норма 6,5-16,0 г/л). Снижение концентрации характерно для гипогаммаглобулинемии, может наблюдаться при длительных воспалительных процессах. Повышение отмечается при инфекционных заболеваниях, чаще бактериальной природы.

IgA (Норма 0,55-2,50 г/л). Снижение соответствует гипогаммаглобулинемии, повышение, как правило, ассоциируется с острыми воспалительными заболеваниями слизистых оболочек.

Гипогаммаглобулинемии

• Лекарственноиндуцированная

Каптоприл, карбамазепин, ГКС, пеницилламин, фенитоин, сульфасалазин, фенклофенак.

• Генетические синдромы (врожденные иммунодефициты).

• Инфекционные болезни – ВИЧ, врожденная краснуха, врожденная ЦМВ-инфекция, врожденный токсоплазмоз, ВЭБ.

• Онкология – хронический лимфобластный лейкоз, неходжкинская лимфома, В-клеточная пролиферация.

• Системные болезни – иммунодефицит, связанный с выраженной потерей иммуноглобулинов (нефроз, тяжелын ожоги, лимфангиэктазия, тяжелая диарея).

Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)

ЦИК – это продукт взаимодействия антигена и соответствующего антитела. Образование ЦИК – естественный процесс, направленный на нейтрализацию и удаление антигенов. Определение ЦИК используют для прогнозирования и мониторинга активности тяжелых инфекций, аутоиммунных заболеваний, злокачественных новообразований, синдрома эндогенной интоксикации.

Методы исследования: осаждение полиэтеленглюколем (ПЭГ 6000) - метод недостаточно чувствителен. Норма: 0-60 ЕД; ЦИК крупнодисперсные – k1,2; ЦИК среднедисперсные - 1,2k1,5; ЦИК мелкодис­персные – k1,5.

Крупнодисперсные ЦИК легко удаляются из кровотока и редко вызывают повреждение тканей. Среднедисперсные и мелкодисперсные ЦИК биологически активны, плохо удаляются из кровотока, вызывают воспалительные изменений тканей.

ЦИК повышены – острые и хронические инфекции; гепатиты, циррозы; аутоиммунные заболевания; злокачественные новообразования; сывороточная болезнь, иммунокомплексные процессы.