17. Идентифицировать культуру микроорганизмов по результатам определения биохими­ческой активности на средах Гиса

Гиса среды («пестрый ряд») – дифференциально-диагностические питательные среды, используемые для выявления сахаролитической активности бактерий (кишечной группы).

Содержат 1% пептонную воду, 0,5% раствор определенного углевода (глюкоза, лактоза, мальтоза, манит, сахароза и др.) и индикатор Андреде (кислый фуксин в растворе NaOH). рН среды = 7,2-7,4. Среда бесцветна, при ферментации углеводов приобретает красный цвет.

Среды Гиса бывают жидкими и полужидкими. В пробирки с жидкими средами для обнаружения газов, являющихся конечными продуктами распада сахаров, опускают «поплавок» - трубочку диаметром 0,5-0,7 см, запаянную с одного конца. «Поплавок» помещают запаянным концом кверху. При образовании в среде газообразных продуктов они вытесняют часть жидкости, находящейся в «поплавке», вследствие чего у запаянного конца его собирается воздушный пузырек.

В полужидких средах Гиса газообразование определяют по наличию мелких пузырьков газа в толще среды и стойкой пены на ее поверхности. Пробирки с набором сред Гисса ставят в штатив в один ряд. На каждой пробирке надписывают название сахара, со­держащегося в среде. На первой пробирке каждого ряда, кроме названия сахара, указывают номер или вид исследуе­мой микробной культуры.

18. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных дис­ков и оценка результатов

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри. На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинако­вом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при температуре 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чув­ствительности к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо приме­нять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. 

18. Описать принципы определения состава и количества микроорганизмов – представи­телей нормальной микрофлоры человека

Мутуализм (взаимно полезное сожительство) и комменсализм (сожительство, односторонне полезное для одного из симбионтов, не причиняющее вреда другому) – две формы симбиоза, характерные для нормальной микрофлоры организма здорового человека. Для микроскопического исследования берут мазки из зева, мазки из зубного налета, мазки ватным тампоном, смоченным в физ. растворе, с запястья ладоней.

Микрофлора кожи

На поверхности кожи различают собственную микрофлору и транзиторную, микробы которой быстро погибают под влиянием бактерицидных свойств кожи (действие выделений потовых и сальных желез), антагонизма аутохтонных видов. Постоянная микрофлора пред­ставлена главным образом стафилококками (в первую очередь эпидермальными, а также золотистыми), коринебактериями, сарцинами. Место постоянного обитания – роговой слой кожи, протоки сальных желез, волосяные фолликулы. У некото­рых людей обнаруживаются стрептококки, дрожжеподобные гри­бы рода Candida, спорообразующие аэробные бактерии. Наиболь­шее число микроорганизмов обитает в склад­ках кожи.

Микрофлора ЖКТ

Микрофлора желудка бедна. Несмотря на попадание с пищей, слюной большого количества микроорганизмов, в 1 мл желудоч­ного содержимого обнаруживается лишь несколько десятков ты­сяч особей и в основном – кислотоустойчивые (лактобактерии, дрожжи и др.). Большинство попадающих в этот биотоп микро­организмов погибают под действием соляной кислоты желудоч­ного сока.

Микрофлору тонкого кишечника принято подразделять на постоянную (защитную, сапрофитную) и оппортунистическую (условно-патогенную). Постоянная защитная микрофлора наиболее многочисленная (до 95%) и в основном представлена лактобактериями, бифидобактериями и кишечной палочкой с нормальными ферментативными свойствами. Как раз они и обеспечивают колониальную резистентность биотопа кишечника: так, бифидобактерии, лактобактерии выделяют молочную, уксусную кислоты, другие вещества, обладающие избирательным антимикробным действием, что подавляет избыточное размножение условно-патогенной микрофлоры и препятствует проникновению и закреплению на слизистой патогенных микробов.

Микрофлора толстого кишечника отличается численным превалированием анаэробов: бифидобактерий, бактероидов, лактобактерий, вейллонелл, клостридий, пептококков – 96-99% всей микрофлоры данного биотопа. Аэробы и факультативные анаэробы (1-4%) представлены энтеробактериями, стафилококками, стрептококками (главным образом фекальными), дрожжеподобными грибами рода Candi­da, кишечными амебами и др.

Полость рта

Наиболее богата по разнообразию видов бактерий, грибов, простейших, вирусов. Постоянные обитатели способны к адгезии – прикреплению к поверхности зубов или слизистой оболочки. Состав микрофлоры зависит от состояния организма, от состава пиши, от гигиены полости рта.

Микрофлора дыхательных путей

Микроорганизмы, содержащиеся во вдыхаемом воздухе, большей частью погибают в полости носа. Собственная же мик­рофлора носа представлена стафилококками, дифтероидами, нейссериями. У части людей на слизистой оболочке носа постоянно обнаруживаются условно-патогенные золотистые стафилококки. Это явление расценивается как резидентное носительство.

Трахея и бронхи свободны от постоянной микрофлоры. Только при нарушении активности эпителия бронхов (например, при ингаляционном наркозе, заболеваниях дыхательной системы, им­мунодефицитах) микроорганизмы могут проникнуть в глубь брон­хиального дерева.

Свободны от микрофлоры кровь и внутренние органы, не сообщающиеся с внешней средой, такие как мозг, сердце, печень, селезенка и др. В норме не имеют резидентной микробной флоры такие органы, как матка, мочевой пузырь, легкие.