29. В чём заключается особенность промоторов фагового генома ?

Преимущество фагового генома состоит в наличии чётко передаваемого сигнала СИЛЬНОГО ПРОМОТОРА, который всегда выигрывает конкуренцию между промотором бактерии и фага.

30. Поясните почему для проведения эксперимента по установлению полной первичной структуры ПРОМОТОРА гена тирозиновой РНК E.Coli в лаборатории Хар Джобинд КОРАНА (Har Gobind KORANA,1977) был выбран фаг Ф50 ?

Для исследований брали фаг Ф 50 благодаря двум его особенностям:

- трансдуцирует в бактерию ГЕН ТРАНСПОРТНОЙ РНК ДЛЯ ТИРОЗИНА

(ген тирРНК)

- цепи ДНК имеют разную удельную плотность

L - легкая цепь

5'------------------------------------------------------------------------------3'

3'-----ПРОМОТОР--ген транспортной тирозиновой РНК---5'

Н - тяжёлая цепь

5'--------------------------------3'

транспортная тирозиновая РНК

31. Укажите основные этапы эксперимента по установлению полной

первичной структуры ПРОМОТОРА гена тирозиновой РНК E.Coli

в лаборатории Хар Джобинд КОРАНА (Har Gobind KORANA,1977)

Для исследований брали:

L-цепь фага Ф 50

L-легкая цепь

5'------------------------------------------------------------------------------3'

3'-----ПРОМОТОР--ген транспортной тирозиновой РНК---5'

Н-тяжёлая цепь 3 ......----------------------------5'

транспортная тирозиновая РНК

5' ......----------------------------3

- цепочку из 21 нуклеотида комплементарную цепи

транспортной тирозиновой РНК

(очень похожая на Н-цепь) без последних 6 нуклеотидов на 3’ конце

- гибридизовал эту цепь с L-цепью ДНК фага Ф50

L-легкая цепь

5'--------------------------------------------------3'

3' ......----------------------------5'

- помещал в систему синтеза ДНК "in vitro"

- ДНК-полимераза досинтезировала в направлении 5'-3'

6 недостающих нуклеотидов и в продолжении досинтезировала структуру ПРОМОТОРА

- после чего уже изучали структуру ПРОМОТОРА

32. Какую форму принимают промоторные области в структуре днк ?

Форму палиндромов

33. Поясните что включает в себя стадия инициации транскрипции

ИНИЦИАЦИЯ транскрипции - образование первой фосфодиэфирной связи в цепи РНК между пурином А или Г, находящимся в форме ТРИФОСФАТА. В момент инициации происходит отщепление ПИРОФОСФАТА.

34. Опишите известные вам стадии инициации транскрипции

- образование первой фосфодиэфирной связи в цепи РНК между

пурином А или Г, находящимся в форме ТРИФОСФАТА

- в момент инициации происходит отщепление ПИРОФОСФАТА

- сразу после акта инициации СИГМА-ФАКТОР от РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ

отделяется и фермент, меняя при этом свою конформацию может неспецифично

транскрибировать дальше

- после отделения СИГМА-ФАКТОРА начинается стадия ЭЛОНГАЦИИ

- первый нуклеотид в нити РНК отличается от остальных тем,

что находится в ТРИФОСФАТНОЙ ФОРМЕ

- за процесс инициации ответственна бетта-субъединица и СИГМА-ФАКТОР РНК-

полимеразы

35. Какие стадии взаимодействия РНК-полимеразы и нуклеотидов

происходят в процессе ИНИЦИАЦИИ ?

- присоединение начального рибонуклеозидтрифосфата к 1-ому центру РНК-

полимеразы, специализированного на воздействии с 3'-ОН группой рибозила

- присоединение второго рибонуклеозидтрифосфата к расположенному рядом

второму центру фермента (центр связывания субстрата)

- замыкание первой фосфодиэстеразной связи с отщеплением пирофосфата

36. Дайте определение стадии ЭЛОНГАЦИИ транскрипции

Последовательное образование фосфодиэфирных связей между рибонуклеозид-3-фосфатами, комплиментарными нити матричной ДНК, их присоединением к рибонуклеозидам растущей цепи РНК в 3'-положении с отщеплением пирофосфата

37. Каким образом действуют на стадию ЭЛОНГАЦИИ траскрипции антибиотик АКТИНОМИЦИН, СТРЕПТОЛИДЕГИН и РИФАМПИЦИН ?

АКТИНОМИЦИН блокирует элонгацию, становясь на пути РНК-полимеразы благодаря своей структуре садясь между рядом стоящими параллельными Г-Ц парами (интерколяция)

СТРЕПТОЛИДЕГИН и РИФАМПИЦИН ингибируют элонгацию связываясь с бетта-субьединицей РНК-полимеразы

38. Что происходит с нитью ДНК в момент транскрипции согласно модели ИВАНОВА-ФЛОРЕНТЬЕВА ?

- водородные связи между 2-3 парами оснований нарушаются при этом истинной

денатурации цепей не происходит;

- используя энергию отщепившегося пирофосфата, РНК-полимераза индуцирует

процесс перехода В-формы ДНК в А-форму ДНК на строго ограниченном участке

(2-3 пары оснований);

- в А-форме ДНК основания меняют наклон своей плоскости и расстояние между

основаниями, образно выражаясь как бы "выворачиваются наружу", облегчая

работу РНК-полимеразы