Индикация и идентификация вирусов. Методы индикации.

Индикация – это обнаружение вирусов непосредственно в исследуемом материале,

в культуральной жидкости или в зараженных клетках.

I.Если вирионы находятся в жидкости, то обнаружить их можно с помощью реакции гемагглютинации.

Суть реакции: некоторые виды вирусов способны спонтанно склеивать (то есть вызывать гемагглютинацию) каких – либо эритроцитов. Например, вирионы гриппа склеивают эритроциты кур, некоторые аденовирусы – эритроциты крысы и т.д. Таким образом, с помощью взвеси эритроцитов в физиологическом растворе можно обнаружить вирусы в вируссодержащей жидкости.

II.Если вирусы размножаются в клеточной культуре, но являются гемагглютинирующими, то можно обнаружить их с помощью реакции гемадсорбции: на культуру наносят взвесь эритроцитов, инкубируют, сливают – если культура заражена, то эритроциты прилипнут прямо к зараженным клеткам – это видно в световой микроскоп.

III.Другие эффекты:

а) вирусы вызывают разрушение монослоя – это называется цитопатогенное действие вируса - ЦПД.

б) вирусы вызывают морфологические изменения клеток: внутриклеточные или внутриядерные включения, образование синцития, симпластов (то есть слияние нескольких клеток в одно образование из-за повреждения клеточных мембран).

Разные варианты ЦПД могут быть характерными для разных вирусов, что дает возможность их дифференцировать.

Таким образом, тем или иным путем можно констатировать наличие размножающихся вирусов либо в культуральной жидкости, либо в культуре клеток.

Серологические методы определения вирусов.

Для того, чтобы идентифицировать вирусы, применяют только серологические методы,

то есть различные приемы идентификации с помощью иммунных диагностических сывороток.

В основе идентификации – реакция нейтрализации вирионов соответствующими антителами. Варианты самих реакций различны, они зависят, прежде всего, от того, где находятся вирусы – в клетках культуры, в клетках образцов тканей, в культуральной жидкости, в жидкости собранной из зараженного эмбриона, в биологических жидкостях организма и т.д.

Наиболее простые и распространенные реакции идентификации вирусов.

1.Реакция торможения гемагглютинации - ртга

Реакция основана на эффекте гемагглютинации (см. выше).

Контроль: вируссодержащая жидкость + взвесь эритроцитов - гемагглютинация

Опыт: вируссодержащая жидкость + диагностическая сыворотка (инкубация) - затем добавить взвесь эритроцитов. Результат: если наблюдается агглютинация – не произошла нейтрализация,

если нет гемагглютинации, значит антитела сыворотки нейтрализовали вирионы - они идентифицированы.

2.Реакция задержки гемадсорбции - рзга

Реакция основана на эффекте гемадсорбции (см. выше)

Проводят в случае культивирования гемагглютинирующих вирусов в клеточных культурах.

Зараженные культуры клеток обрабатывают сывороткой с известными антителами,

после наносят взвесь эритроцитов. Если вирус нейтрализовала сыворотка,

то гемадсорбции (прилипания эритроцитов) не произойдет

3.Реакция нейтрализации – РН - проводят в культуре клеток, зараженных вирусами.

Необходимое условие для изучения – наличие ЦПД (см. выше).

Культуры клеток, зараженных вирусами, обрабатывают диагностическими сыворотками, после

чего культивируют 2-3 суток. При отсутствии характерного ЦПД можно сделать вывод о том, что вирусы нейтрализованы.

Во всех случаях сравнивают контроль – без сыворотки и опыт – с нейтрализующими сыворотками.