1. Гистохимия

2. Иммуногистохимия

3. Молекулярно-генетические методы

Гистохимические окраски

• Обзорная окраска (гематоксилин и эозин)

• Нейтральные слизи (ШИК)

• Кислые слизи (альциановый синий)

• Эластика (Верхгофф – Ван Гизон)

• Ретикулин (Гомори)

• Кислотоустойчивые бактерии (Циль-Нильсен)

• Микроорганизмы и грибы (Грам)

• Романовский-Гимза или азур-эозин

• Амилоид (Хайман)

ШИК-положительные вещества

Скопления актиномицетов. Базальные мембраны. Хрящ. Цереброзды. Коллаген ареолярной соединительной ткани. Составные липиды. Гликоген. Керазин (болезнь Гоше). Почечные трубочки. Гранулы мегакариоцитов. Муцины: кишечного тракта, пепсиновых желез, желез шейки матки, слюнных желез, конъюнктива,

бронхиальные железы, фолликулы и кисты яичника, секрет простатических желез, амилоидные тельца, Капсула хрусталика глаза. ·Панкреатические зимогенные гранулы. Гранулы клеток Панета (крысы, гвинейские свиньи, кролики). Фосфолипиды. Β-клетки гипофиза. Почечные гиалиновые слепки. Палочки сетчатки глаза. Тельца Русселля. Крахмал. Коллоид щитовидной железы.

Альциановый синий

• Окрашивает кислые мукополисахариды

• Окрашивает кислую слизь в метастатических раках (кишечника, яичника).

Эластические волокна

Являются обязательным компонентом ткани легкого и видны в артериях мышечного типа.

Вены и артерии имеют разное строение эластического каркаса.

Для оценки патологу важно увидеть в одном срезе и коллаген и эластику.

• Орсеин

• Железо-резорцин-фуксин

• Альдегид-фуксин

• Железный гематоксилин

Ретикулярные волокна

Каркас ретикулярных волокон является основой для легочной ткани.

Выявляется методами с использованием щелочного раствора нитрата серебра. Методов предложено около 50.

Циль-Нильсен

• Окрашивает кислотоустойчивые бактерии (туберкулез, нокардиа)

Романовский-Гимза

Метод окраски сейчас является самым широко используемым и многоцелевым. Может использоваться в качестве базового обзорного метода.

Выявляет типы гранулоцитов крови, паразитов в эритроцитах, соединительную ткань, бактерии, грибы и многие другие структуры.

Амилоид

Патологический белок, депозиты которого можно увидеть с помощью разных методов, включая ИГХ и поляризационную микроскопию.

Самый простой метод окраски с использованием конго красного.

Метод Грама

Позволяет выявить большинство бактерий и оценить состав их клеточных стенок.

Бактерии удается классифицировать как грамположительные (синие) и грамотрицательные (красные).

2. Введение. История развития метода. Основные фундаментальные знания в области иммунохимии

Введение

Иммуногистохимия (ИГХ) – метод выявления точной локализации клеточного или тканевого компонента (антигена) с помощью иммунологических и гистохимических реакций; при этом иммунологический анализ срезов тканей или цитологического материала проводится в условиях сохранения морфологии клеток.

В диагностической практике можно выделить несколько основных областей применения ИГХ: во-первых, при исследовании опухолей человека с целью определения гистогенеза недифференцированных опухолевых образований, отдаленных метастазов, для дифференцировки различных тканевых компонентов, составляющих комплексные опухоли; во-вторых, с целью прогностической оценки дальнейшего течения заболевания и, наконец, при назначении терапии.

Особую ценность иммуногистохимия приобретает в том случае, когда имеются трудности в определении гистогенетической принадлежности опухолевой ткани на основании изучения рутинных срезов, окрашенных гематоксилин-зозином, при этом морфологи нередко используют термин «недифференцированные опухоли». Выявление гистогенеза опухоли необходимо для решения вопроса о тактике лечения заболевания и прогностической оценке. Наибольшее клиническое применение в настоящее время ИГХ получила при классификации лейкозов и лимфом. Определенные панели антител позволяют охарактеризовать острые и хронические лейкозы, лимфогранулематоз и различные типы неходжкинских лимфом. Так, используя антитела к общему лейкоцитарному антигену, выявляют лимфомы, а антитела к белкам S-100 и HMB-45 позволяют определить меланомы.

Иммуногистохимические исследования с целью оценить органоспецифичность отдаленных метастазов проводятся с использованием набора антител, характеризующих антигенные свойства клеток различных органов: в частности, антитела к PSA выявляют рак простаты; наличие в опухолевой ткани рецепторов к эстрогенам и прогестерону позволяет сделать предположение о метастазе из молочной железы или эндометрия; антитела к тиреоглобулину выявляют опухолевые клетки фолликулярного рака щитовидной железы. Большую помощь в определении органной принадлежности метастазов оказывают антитела к различным цитокератинам.

С целью прогностической оценки заболевания, предсказания биологического поведения опухоли, появления метастазов, эффективности терапии проводят исследование пролиферативной активности (Ki-67), выраженности ангиогенеза, определение рецепторов факторов роста (продукты онкогенов her-2/neu при раке молочной железы), выявление рецепторов к стероидным гормонам, изучение степени анаплазии клеток (мутантный белок гена p53).

Несомненна роль ИГХ исследования при определении рецепторов к эстрогенам и прогестерону для назначения ряда гормональных препаратов (тамоксифен).

Таким образом, ИГХ представляет ценный современный метод диагностики, позволяющий определить гистогенез, степень пролиферативной активности и анаплазии опухолевых клеток, охарактеризовать прогноз и предложить адекватные методы лечения пациентов. Однако не следует и преувеличивать возможности данного метода при лечении конкретного пациента. ИГХ является только дополнительной методикой исследования, и ее результаты должны быть интерпретированы в контексте с другими данными обследования, включая клинические.