Подпись преподавателя ________________
Дата__________________
Занятие №8
Тема: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе. Вирусы бактерий (фаги). Идентификация бактерий с помощью фагов.
Вопросы для обсуждения:
Вирусологический метод исследования, его этапы.
Методы культивирования вирусов.
Получение и приготовление первичных, перевиваемых и полуперевиваемых культур клеток.
Что представляют собой однослойные, суспензионные и органные культуры клеток?
Способы заражения куриного эмбриона.
Индикация вирусов в клеточных культурах и курином эмбрионе.
Культивирование вирусов в организме лабораторных животных (биологический метод исследования).
Ультраструктура и морфологические типы вирусов бактерий.
Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой.
Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой и результат этого процесса.
Отличия лизогенных бактерий от нелизогенных. Фаговая конверсия.
Практическое использование вирусов бактерий.
Тесты на фагочувствительность и фаготипирование бактерий.
Практические задания:
Ознакомиться с методами приготовления клеточных культур и назначением сред (199, Игла), солевых растворов (раствор Хенкса, раствор фосфатного буфера с антибиотиками), специальных реактивов (трипсин, версен).
Изучить методы заражения и вскрытия куриного эмбриона. Подписать способы заражения, применяемые для накопления различных вирусов.
Микроскопировать клеточную культуру Hela, зараженную энтеровирусами, с целью обнаружения цитопатического действия вирусов.
Выявить цитопатическое действие энтеровирусов по образованию бляшек в культуре клеток под бентонитовым покрытием.
Поставить реакцию гемагглютинации с аллантоисной жидкостью куриного эмбриона, зараженного вирусом гриппа, по схеме.
Учесть результат реакции гемагглютинации (РГА) и определить гемагглютинационный титр вируса. Данные внести в таблицу.
Таблица 1.
Схема постановки реакции гемагглютинации для определения титра вируса
Ингредиенты в мл |
Лунки |
Контроль эритроцитов |
||||
1-я |
2-я |
3-я |
4-я |
5-я |
6-я |
|
0,85% раствор NaCl |
0,9 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Аллантоисная жидкость |
0,1 |
→ |
→ |
→ |
→ |
|
Полученные разведения |
1 : 10 |
1 :2 0 |
1 : 40 |
1 : 80 |
1 : 160 |
|
1% взвесь куриных эритроцитов |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
0,5 |
Учет результатов |
|
|
|
|
|
|
Условные обозначения:
(+) - полная агглютинация эритроцитов, имеет вид зонтика
(-) - компактный осадок эритроцитов, как в контроле, имеет вид «пуговки»
Зарисовать видимые проявления РГА: