2. Материалы и методы проведения исследования

2.1. Методика оценки уровня экологического неблагополучия в различных регионах г. Минска на основе оценки флуктуирующей асимметрии листовой пластинки Betula pendula.

Объект исследования - Береза повислая (Betula pendula).

Сбор и хранение материала. Материала следует проводить после остановки роста листьев (в средней полосе начиная с июля по сентябрь).

При выборе деревьев важно учитывать, во-первых, четкость определения принадлежности растения к исследуемому виду. Во избежание ошибок следует выбирать деревья с четко выраженными признаками березы повислой. Во-вторых, листья должны быть собраны с растений, находящихся в сходных экологических условиях (учитывается уровень освещенности, увлажнения и т.д.). Рекомендуется выбирать деревья, растущие на открытых участках (полянах, опушках), т.к. условия затенения являются стрессовыми для березы и существенно снижают стабильность развития растений. В-третьих, при сборе материала должно быть учтено возрастное состояние деревьев. Для исследования выбирают деревья, достигшие генеративного возрастного состояния.

В данном случае сбор проводился на пяти различных участках в г. Минск:

1. ул. Пономаренко

2. ул. Притыцкого-Лещинского

3. ул. Тимирязева, 29

4. ул. Руссиянова

5. ул. Славинского

На каждом участке было выбрано пять соответствующих всем параметрам берез. С каждого дерева собрано 100 листьев (500 листьев с участка). Использовались листья только с укороченных побегов (см. рис.1). Листья связывают за черешки. Листья с одного растения хранятся отдельно, для того, чтобы в дальнейшем можно было проанализировать полученные результаты индивидуально для каждого дерева. Все листья, собранные для одной выборки, необходимо сложить в полиэтиленовый пакет, туда же вложить этикетку. В этикетке указать номер выборки, место сбора (делая максимально подробную привязку к местности), дату сбора, кто произвёл сбор. Рис. 1. Побег березы повислой.

Обработка материала. Для дальнейшей компьютерной обработки необходимо отсканировать листья. Сканируется по 40 листьев с каждого дерева на каждом участке. Затем отобранные листья сушатся в термостате для дальнейших исследований. Листья с каждого дерева на каждом участке обрабатываются отдельно.

Выполнение исследований. Далее для измерения листьев березы применяется программа Pendula. Осуществляется измерение следующих параметров:

Обработка и оформление результатов исследований. Величина асимметричности оценивается с помощью интегрального показателя - величины среднего относительного различия на признак (средняя арифметическая отношения разности к сумме промеров листа слева и справа, отнесенная к числу признаков). Результаты исследований заносятся в таблицу. При занесении данных в компьютер для хранения и математической обработки, используют программу Microsoft Excel.

2.2. Методика оценки уровня экологического неблагополучия в различных регионах г. Минска по признаку «седого» пятна на листьях растений в популяциях Trifolium repens.

Объект исследования - Клевер ползучий (лат. Trifolium repens)

Сбор и хранение материала. Сбор растительного материала необходимо проводить в период обильного цветения клевера (июнь–июль). В зависимости от распределения вида на местности и его численности, необходимо искать растения с разными формами седых пятен, срывать их и закладывать в ботанические папки для последующего анализа. В данном случае сбор проводился на пяти различных участках в г. Минск:

1. ул. Пономаренко

2. ул. Притыцкого-Лещинского

3. ул. Тимирязево, 29

4. ул. Руссиянова

5. ул. Славинского

На каждом участке было отобрано по 100 листьев клевера по возможности с различными формами седых пятен. При существенном заселении территории использовали рамку размером 25 см х 25 см, сделанную из алюминиевой проволоки. Дальнейшую обработку листьев клевера желательно проводить непосредственно после сбора. Хранить листья вместе с этикетками, на которых необходимо указать номер выборки, место сбора (делая максимально подробную привязку к местности), дату сбора, кто произвёл сбор.

Обработка материала. Для дальнейшей компьютерной обработки необходимо отсканировать листья. Сканируются все листья с каждого участка. Затем листья сушатся в термостате для дальнейших исследований. Листья с каждого участка обрабатываются отдельно.

Выполнение исследований. В лаборатории по полученным изображениям листьев клевера определяют частоту встречаемости каждого фенотипа и генотипа для каждой изученной популяции, обитающей в разных экологических условиях. При анализе образцов растений клевера используют таблицу, предложенную Дж. Л. Брюбейкером в 1966 г. (см. рис. 2). В ней представлены 8 наиболее часто встречающихся аллелей гена V и 36 вариантов их взаимодействия.

Обработка и оформление результатов исследований. Вычисляется степень встречаемости различных генотипов, результаты заносятся в таблицу. Делается вывод о влиянии экологических и антропогенных факторов. При занесении данных в компьютер для хранения и математической обработки, используют программу Microsoft Excel.

Рис. 2. Таблица Дж. Л. Брюбейкера