2. Оборудование для изготовления срезов.

При микроскопическом исследовании ЛРС (подземных органов, кор, плодов, семян, а в некоторых случаях — листьев) возникает необходимость в приготовлении срезов. Чаще всего срезы готовят с помощью бритвы, иногда для этих целей используются микротомы.

Бритва

Для получения срезов применяют обыкновенную остро отточенную бритву, которую держат правой рукой. Перед изготовлением срезов поверхность лезвия надо смочить водой, чтобы срезы не прилипали к бритве. Объект, с которого делают срезы, берут в левую руку, зажимая его между большим и указательным пальцами так, чтобы поверхность его лишь немного выступала над уровнем пальцев. Предварительно поверхность объекта выравнивают с помощью острого скальпеля или ножа. При изготовлении среза бритву ведут легким, скользящим движением наискось от верхушки лезвия. Каждый срез должен быть сделан одним движением; нельзя, делая срезы, «пилить», так как в этом случае срезы получаются неровными. Срезы не должны быть большими; чем меньше срез, тем легче сделать его тонким и ровным.

Срез через всю толщину корня или корневища делают редко, обычно достаточно срезать сравнительно узкую полоску, проходящую через наружные и внутренние ткани органа (по радиусу поверхности разреза). При этом тонкие и наиболее ровные срезы получаются, если срез начинают не от края объекта, а положив лезвие бритвы на поверхность разреза. Делают несколько срезов и для дальнейшего исследования под микроскопом выбирают лучшие.

Микротом

С помощью микротома получают одинаковые и очень тонкие срезы в виде непрерывного ряда. Существуют различные типы микротома, наиболее распространенным и универсальным является тип санных (или салазочных) микротомов.

3. Техника микроскопического исследования.

Основная задача микроскопической техники состоит в том, чтобы получить для микроскопического исследования препарат, отвечающий требованиям диагностики сырья.

Объект для микроскопического исследования, подготовленный соответственно особенностям каждой морфологической группы, должен быть заключен в жидкость, так как в сухом виде объекты темны и неразличимы. Степень видимости разных объектов основана на различии их оптических свойств, а также оптических свойств среды, в которой они рассматриваются.

Вся микроскопическая техника сводится к тому, чтобы получить различные структуры, ясно различимые в микроскоп, чему способствует просветление, окрашивание объектов, помещение в соответствующую среду и т.д.

Стекла, используемые для приготовления микропрепарата, должны быть чистыми и сухими.

Препарат на предметном стекле накрывают покровным стеклом. При неосторожном накладывании покровного стекла в препарате часто образуются пузырьки воздуха, поэтому стекло следует класть наклонно, прикоснувшись сначала одним краем к жидкости, а затем, придерживая стекло препаровальной иглой, положить полностью. Попавшие пузырьки воздуха можно удалить легким постукиванием по покровному стеклу тупым концом препаровальной иглы или слегка подогреть над пламенем горелки. Если включающая жидкость не заполняет всего пространства между предметным и покровным стеклом или она испарилась при нагревании препарата, то ее добавляют сбоку небольшими каплями. Если, наоборот, покровное стекло свободно плавает вследствие избыточного количества жидкости, то ее следует удалить при помощи фильтровальной бумаги, подведенной сбоку. Покровное стекло должно быть совершенно сухим сверху и не плавать, а плотно прилегать к предметному стеклу, параллельно его поверхности.

Если к готовому микропрепарату требуется прибавить реактив или заменить включающую жидкость, то нужно нанести 1-2 капли реактива рядом с покровным стеклом, не снимая его, а с противоположной стороны удалить жидкость полоской фильтровальной бумаги. Если жидкость очень густая (например, глицерин), то для добавления ее покровное стекло следует приподнять с одного края иглой или снять его. Иногда при окрашивании приходится переносить объект на другое предметное стекло (окрашивание удобно проводить на часовых стеклах, в выпарительных чашках, бюксах).

Для лучшего просветления исследуемого объекта его нагревают. Продолжительность нагревания различна в зависимости от вида сырья. Нагревают препарат, закрытый покровным стеклом, на небольшом пламени горелки. При нагревании следует держать препарат наклонно, под углом 10-15˚ (так лучше удаляются пузырьки воздуха), иногда доводят до слабого закипания жидкости, что усиливает просветляющее действие реактива.