МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
к изучению гистологических препаратов по ОБЩЕЙ ГИСТОЛОГИИ (для итогового экзамена)
Препарат 1. Мазок периферической крови, окрашенный по методу Романовского-Гимза.
Соответственно их тинкториальным свойствам для характеристики тех или иных структур форменных элементов крови применяются понятия:
базофилия (структуры окрашены в тёмно-синий, фиолетовый цвет) – Сродство к основному красителю метиленовому синему; типично для окрашивания ДНК в ядре и РНК в цитоплазме (например, рибосом).
азурофилия (лиловый цвет) – сродство к красителям азурам; типично для лизосом;
эозинофилия (розовый или красный цвет) – сродство к кислому красителю эозину; особенно хорошо им окрашивается гемоглобин, заполняющий цитоплазму эритроцитов;
нейтрофилия (слабо-розовый/лиловый) – характерна для специфических гранул нейтрофильных лейкоцитов.
Под малым увеличением студенты фокусируют препарат на ядрах лейкоцитов, затем изучают форменные элементы крови под большим увеличением. Лейкоциты идентифицируют, учитывая размеры клетки, форму ядра, соотношения объёмов ядро/цитоплазма, тинкториальные свойства цитоплазмы, наличие зернистости в цитоплазме.
Критерии идентификации клеток крови на мазках периферической крови, окрашенных по методу Романовского-Гимза.
Эритроциты. Средний диаметр 7,2 μm. Эритроциты округлые, безъядерные клетки. Они окрашиваются в оттенки розового цвета (эозинофилия) благодаря высокому содержанию гемоглобина. Центральная часть окрашивается светлее, чем периферическая, вследствие дисковидной формы эритроцитов (края толще, чем центр).
Нейтрофильные гранулоциты – самые многочисленные лейкоциты (40-75%). Диаметр 10-12 мкм. Зрелые сегментоядерные лейкоциты имеют интенсивно окрашенное (гетерохроматиновое) ядро из 2-5 сегментов, связанных узкими нитевидными перемычками. Цитоплазма на светооптическом уровне слабооксифильна. Специфические (вторичные) нейтрофильные гранулы – очень мелкие (0,1 – 0,3 мкм), окрашиваются слабо (нейтрофильно) и плохо видны под световым микроскопом. Видны, главным образом, азурофильные (первичные, неспецифические, лизосомальные) гранулы, составляющие 10-30% общего числа гранул, они более крупные (0,4-0,8 мкм) и окрашиваются азуром в розово-фиолетовый цвет. В крови встречаются также менее зрелые формы, отличающиеся от зрелых формой ядер: палочкоядерные нейтрофилы (1-6%), их ядро имеет форму изогнутой палочки, подковы или латинской буквы S; и юные нейтрофильные гранулоциты (до 0,5%) с бобовидным ядром.
Эозинофильные гранулоциты (эозинофилы) – на мазках крупнее, чем нейтрофилы (диаметр 12-17 мкм); ядро обычно состоит из двух, реже трёх сегментов, светлее, чем ядра нейтрофилов; легко узнаются на мазках благодаря многочисленным эозинофильным гранулам, заполняющим их цитоплазму (около 200 гранул на клетку). Гранулы более крупные (до 1,5 мкм), чем гранулы нейтрофилов, окрашиваются эозином в розово-красный цвет).
Базофильные гранулоциты (базофилы) – самая малочисленная группа лейкоцитов и гранулоцитов (0.5-1.0% от общего числа лейкоцитов). Размеры на мазках составляют 9-12 мкм. Ядра базофильных гранулоцитов – дольчатые (содержат 2-3 сегмента) или S-образные, относительно плотные, но более светлые, чем у нейтрофилов и эозинофилов, часто трудно различимы, так как маскируются ярко окрашенными специфическими гранулами. Специфические базофильные гранулы – крупные (диаметр 0.5-2.0 мкм), окрашиваются метахроматически – с изменением оттенка основного красителя вследствие высокого содержания сульфатированных гликозаминогликанов.
Лимфоциты занимают второе место по численности среди лейкоцитов взрослого (20-35%). Они представляют собой группу морфологически сходных, но функционально разнообразных лейкоцитов-агранулоцитов. По размерам выделяют группы малых, средних и больших лимфоцитов.
Малые лимфоциты – диаметр на мазках 6-7 мкм – составляют до 80-90% всех лимфоцитов крови. Ядро малого лимфоцита – круглое, овальное или бобовидное, тёмное (с преобладанием гетерохроматина), занимает до 90% площади клетки. Цитоплазма малых лимфоцитов, окружающая ядро в виде узкого ободка, окрашивается резко базофильно.
Средние лимфоциты (диаметр на мазках – 8-9 мкм) в крови человека составляют около 10% всех лимфоцитов. Ядра светлее, чем ядра малых лимфоцитов, а цитоплазма занимает относительно больший объём в клетках.
Большие лимфоциты – диаметр на мазках – 10-18 мкм, обычно отсутствуют в крови. Характеризуются относительно светлым ядром (с преобладанием эухроматина) ядром округлой или бобовидной формы с отчетливо выявляемыми ядрышками, обширной слабобазофильной цитоплазмой. Они обычно являются активно делящимися (бластными) формами развивающихся клеток лимфоидного ряда. Особая разновидность больших лимфоцитов - большие гранулярные лимфоциты (БГЛ) (5-10% лимфоцитов крови); ядро БГЛ – бобовидное с вдавлениями, умеренно плотное, смещенное к одному краю клетки; цитоплазма светлая, содержит 30-50 крупных азурофильных гранул. БГЛ выполняют функцию NK-клеток (натуральные киллеры).
6. Моноциты –самые крупные из лимфоцитов (размеры на мазках – 18-20 мкм). Ядро крупное, эксцентрично расположенное, чаще бобовидной формы (реже слабо-дольчатое), более светлое, чем у лимфоцитов (гетерохроматин рассеян в виде мелких гранул), иногда видно ядрышко. Цитоплазма слабобазофильная (серовато-голубая), в цитоплазме присутствуют азурофильные гранулы (лизосомы).
Препарат 2. Рыхлая волокнистая (неоформленная) соединительная ткань (РВСТ). Тотальный (пленочный) препарат подкожной рыхлой соединительной ткани. Окраска железным гематоксилином.
Препарат представляет собой плёнку рыхлой волокнистой соединительной ткани, которую растягивают на покровном стекле, фиксируют и окрашивают. При этом получается препарат неодинаковой толщины. На малом увеличении микроскопа следует выбрать наиболее светлый участок препарата, затем рассмотреть его под большим увеличением.
На препарате можно различить все три компонента рыхлой волокнистой соединительной ткани: клетки различных типов, волокна и основное амopфное вещество.
Основное аморфное вещество – гомогенное слабоокрашенное вещество, фон для волокон и клеток.
Волокна: коллагеновые волокна – более толстые, лентовидные, слегка извитые, неветвящиеся; эластические волокна – тонкие, прямые, иногда разветвленные.
Клетки: основные клетки волокнистой соединительной ткани – фибробласты и макрофаги.
Фибробласты - наиболее многочисленный и функционально ведущий тип клеток РВСТ, это удлиненные отростчатые клетки с нерезкими (размытыми) контурами клетки (поскольку эктоплазма фибробластов по восприятию красителя не отличается от основного вещества) и с крупным светлым овальным ядром.
Макрофаги в отличие от фибробластов имеют неровные, но чёткие границы клетки, цитоплазма более тёмная вакуолизированная (вследствие большого количества фаголизосом и вакуолей), ядро – тёмное, плотное, более мелкое иногда бобовидной формы.
На препаратах также могут встретиться и другие клетки: тучные клетки, гранулоциты, лимфоциты, плазматические клетки.
Тучные клетки (тканевые базофилы) – крупные клетки овальной или неправильной формы с округлым ядром, цитоплазма содержит множество округлых, сильно окрашенных гранул, которые маскируют плохо различимое ядро. Чаще всего располагаются по ходу кровеносных сосудов.
Лимфоциты характеризуются очень плотным маленьким ядром и минимальным количеством цитоплазмы.
Нейтрофильные гранулоциты – мелкие клетки, ядро которых может иметь кольцевидную форму (поскольку данный препарат из ткани крысы).
Плазматические клетки – более крупные клетки с эксцентрично расположенным ядром, в которым чередование гетеро- и эухроматина даёт характерную картину «колеса со спицами», цитоплазма тёмная, за исключением светлой зоны около ядра, называемой «дворик», или «макула» (зона комплекса Гольджи и центриолей).