3. Определение чистоты выделенной культуры

Выросшие изолированные колонии отсевают бактериологической петлей на поверхность скошенной агаризованной среды в пробирке. Поскольку изолированные колонии иногда могут формироваться не только из отдельных клеток, обязательным этапом выделения чистой культуры должна быть проверка их однородности. Это осуществляется несколькими способами: визуальным, микроскопическим и высевом на соответствующие питательные среды.

А) При визуальном контроле исследуют рост культуры по штриху на поверхности скошенной среды; в том случае, если рост неоднороден, считают, что культура загрязнена и требуется ее дополнительная расчистка.

Рис. 1. Схема рассева бактерий штрихами для получения

изолированных колоний

При описании колоний бактерий определяют их диаметр в миллиметрах, пигментацию, форму (точечная, круглая, волокнистая, неправильная, ризоидная), высоту, профиль (плоский, высокий, выпуклый), вид края. Край колонии может быть гладким, волнистым, лопастным, зубчатым, волокнистым, складчатым и т. д. Для рассмотрения краев используют микроскоп с малым увеличением. Следует описать также и поверхность колоний, которая бывает гладкой, блестящей, шероховатой, тусклой, неровной, гранулированной матовой, мукоидной, слизистой. Отмечают степень прозрачности колоний (прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные) и их консистенцию при проверке иглой: маслянистую, вязкую, сухую. На характеристики колоний могут влиять среда, возраст культуры, условия культивирования.

Б) Чистоту культур микроорганизмов обязательно нужно контролировать путем микроскопии клеток. Для этого готовят препарат фиксированных окрашенных клеток, который микроскопируют с иммерсионной системой. Клетки чистых культур микроорганизмов, как правило, однородны по размеру и окраске по Граму. Однако, следует помнить, что колонии, вырастающие из чистой культуры могут быть гладкие (S) и шероховатые (R). Кроме того, в чистых культурах многих бактерий могут появляться кокковидные клетки, цисты, споры (морфологический полиморфизм).

Наконец, некоторые микроорганизмы проявляют грам-вариабельность.

В) Чистоту культуры клеток проверяют также и путем повторного рассева на селективные среды, обеспечивающие избирательный рост тех или иных микроорганизмов. Критерием чистоты в этом случае является однородность формирующихся при этом колоний.

Таким образом, Схема выделения чистой культуры в лабюораторной практике выглядит следующим образом:

	Этапы выделения чистой культуры бактерий
I этап	Нативный материал
	Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре). Посев на плотные питательные среды (получение колоний).
II этап	Изолированные колонии
	Изучение колоний (культуральные свойства бактерий). Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке (морфологические свойства бактерий). Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры.
III этап	Чистая культура
	Определение культуральных, морфологических, биохимических и других свойств для идентификации культуры бактерий

Среды, применяемые для культивирования микроорганизмов:

Универсальные питательные среды: