2. Материал,порядокподготовкиипроведенияэкспериментовнамоделяхингаляционнойтравмы

ЭкспериментальнаячастьработывыполненанабазекафедрысудебноймедициныиправоведенияГБОГБОУВПО"ПервыйСанкт-Петербургскийго-сударственныймедицинскийуниверситетимениакадемикаИ.П.Павлова"со-вместноснаучнымсотрудникомпатологоанатомическогоотделенияГБУНИИСПим.И.И.ДжанелидзеМ.М.Ермолаевойна142нелинейныхбелыхкрысах-самцахмассой180-220г.Всекрысысодержалисьввивариивстандартныхус-ловиях.Содержание,питание,уходзаживотнымиивыведениеихизэкспери-ментаосуществляливсоответствиистребованиями«Правилпроведенияработсиспользованиемэкспериментальныхживотных»(ПриложениекприказуМЗСССРот12.08.1977№755).Все животные содержалисьприсходныхусловияхвотношениитемпературы,влажностииосвещения,атакжерационапитания(комбикормПК-120–1,Россия).Передопытомосуществляливизуальныйос-мотрживотных,слабыеибольныеживотныеотбраковывались,производилосьвзвешивание.

Всеговыделено4группы:1–интактныеживотные(12)дляопределенияпоказателейвнормеитриопытных:2–животныесдинамическойзатравкойпродуктамигоренияполивинилхлорида(ПВХ)(44),3–крысысостатическойингаляционнойзатравкойпарамиаммиака(NH4)(43),4-сизолированнымитермическими ожогамидыхательныхпутей(43)(таблица7).

Таблица7Группыэкспериментальныхисследованийвзависимостиотфакторатравмати-ческоговоздействиянатрахеобронхиальноедерево

Времязабораматериалапослетравмы	фактортравматическоговоздействия
	химический		термическийфактор (n)
	парыаммиака(n)	продукты горенияПВХ(n)
1час	11	11	12
3часа	10	11	11
6часов	10	11	11
24часа	11	12	9
Контрольная группа(n)	12
Итого:	142

Всеболезненныеманипуляциипроизводилиподнембуталовымнаркозом(внут-рибрюшинновдозе5х10^-3г/100гмассы тела).

ВыборПВХиаммиакадляэкспериментальноймоделиингаляционнойтравмывыбраннамивсвязистем,чтоданныевеществаявляютсяпродуктамитермическогоразложенияигоренияиотносятсякаварийнохимическиопаснымвеществам,которыеширокоиспользуютсявстроительныхматериалах,одеждеиаксессуарах,впромышленномпроизводстве.Пофизиологическомудействиюнаорганизмаммиакотноситсякгруппевеществраздражающегодействия,аПВХ– кцитотоксическимвеществам.Таккакмеханизмдействиятоксическихвеществсвязанспрямымилиопосредованнымповреждениемклеточныхструктурорга-низма,впоследующемизложенииматериаламыбудемотноситьаммиакиПВХквеществамцитотоксическогодействия.

ДлядинамическихзатравокпродуктамигоренияПВХиспользовалиспеци-альноизготовленноеприспособление.Взатравочнойкамересоздаваласькон-центрациятоксиканта1000-1500мг/м³,приводящаякповреждениюдыхатель-ныхпутейивызывающая опасностьразвитияотекалегких(рисунок3).

Рисунок3.ПриспособлениедлядинамическихзатравокэкспериментальныхживотныхпродуктамигоренияПВХ(пояснениявтексте).

ЗаданнаяконцентрациярассчитываласьисходяизмассынавескиПВХсучетомвыходасвободнойHClпригоренииполимера,равной58%ипотерьве-ществазасчетконденсации.НавескуПВХ(1)массой1,5гсжигаливтрубчатоймуфельнойпечи(2)притемпературе400-450ºС.Спомощьюкомпрессора(3)то-комвоздухасоскоростью0,1л/минпродуктыгоренияподаваливзатравочнуюкамеруобъемом10л(4).Скоростьпотокавоздухарегулировалишариковымреометром(5).Выходнойштуцерзатравочнойкамерыбылснабженводянымзамком(6).Температуравоздухавзатравочнойкамереконтролироваласьспо-

мощьютермометра(7)исоставляланапротяженииэксперимента19-22^оС.Экс-

позициясоставляла10-12минут.

ИнгаляционнуютравмуNH_{3вызывали}концентрациейтоксиканта400-450мг/м^3взатравочнойкамере,котораясчитаетсяопаснойдляжизни(Вредныеве-ществавпромышленности,1990)(рисунок4).Длязатравокиспользовалипри-

способление,состоящееизтермостата(1),вкоторыйпомещалидиффузионныйнатекатель(2)с25%растворомаммиака.

Рисунок4.При-

способлениедлястатическихингаляционныхзатравокэкспериментальныхжи-вотныхNH₃(пояснениявтексте).

ДиффузионныйнатекательфиксироваликТ-образнойстекляннойтрубке

(3),одинконецкоторойсоединялискомпрессором(4),адругой–сзатравочнойкамерой(5).Посленагреваниядотемпературы58-60ºС(температуракипенияаммиака),образующиесяпарысоздаваемымспомощьюкомпрессоратокомвоз-духасоскоростью0,1л/минподаваливзатравочнуюкамеруобъемом10л(5).Выходнойштуцеркамерыснабженводянымзамком(6).Скоростьпотокавоздухарегулировалишариковымреометром(7);температурувтермостате–ртутнымтермометром(8)сценойделения1ºС.Экспозициясоставляла10-12минут.Опре-делениеконцентрацииNH_3взатравочнойкамерепроводилирасчетно-весовымметодом.

Дляполучениявэкспериментеизолированнойтермическойтравмыдыха-тельныхпутейиспользовалсятермостат(1),которыйразогревалидотемперату-ры250-300^оС (рисунок5).

Послеразогреватермостатадозаданнойтемпературыспомощьюкомпрес-сора(2)нагнеталивнегоизбыточныйобъемвоздуха.Содержащийсявтермо-статенагретыйвоздухчерезотводящуюстекляннуютрубку(3),расположеннуювверхнейчаститермостата,поступалвширокуюстекляннуюворонку(4).Дляизбежанияконтактныхтермическихожоговкожиживотныхвнутреннююпо-верхностьворонкипокрывалислоямитермоизолирующихматериалов-огне-упорнойглинойиасбестом(5).

Рисунок5.Приспособлениедляингаляции экспериментальнымиживотныминагретоговоздуха(пояснениявтексте).

Такимжеобразомосуществлялитермоизоляциюнаружнойчастиотводя-щейтрубки.Головукрысыфиксировалиспомощьювлажныхбинтов.Дыханиеживотныхбылосамостоятельным,температуравоздухаудыхательныхотвер-стийнапротяженииэкспериментаизмеряласьэлектротермометром(6).Экспо-зициясоставляла2,5-3мин.

Длявыявленияморфологическихособенностейвдыхательнойсистемеприизолированномхимическомитермическомвоздействиигистологическомуис-следованиюподверглись142гистотопограммтрахеиибронхолегочнойсистемы,атакже284гистологическихпрепаратовпочекэкспериментальныхживотных.

Дляопределенияуровняэндогеннойинтоксикацииивыявленияопосредо-ванноговоздействиянафункциюпочекуэкспериментальныхживотныхвыполне-но142биохимическихиклиническиханализовкрови,атакже50цитологическихисследованийлаважнойжидкости.Пробыкровизабиралиодноразовымпластико-вымшприцомизбрюшногоотделааортывколичестве5мл,чтосоставляетпри-близительно½отвсегообъемакровикрыс,вследствиечегонаступаласмертьжи-вотных.Забор кровипроизводиливследующиесроки:через1,3,6и24чпослена-чалапроведенияэксперимента.ВсывороткекровиопределялиуровеньМСМλ₂₅₄,МСМλ_280ибиохимическиепоказателикрови(креатинин,мочевина).Послецитоло-гическогоисследованиямазкакровирассчитывалилейкоцитарныйиндексинток-сикации(ЛИИ),лимфоцитарныйиндекс(ЛИ)ииндекснейтрофильногосдвига

(ИНС).Исследованиелаважнойжидкости производиливгруппестермическойин-галяционнойтравмойвовсесрокиисследования.

Сцельювыявлениявкладабиологическиактивныхвеществнаизменениявлегкихипочкахпроведеныисследованиянагруппекрыс(n=10)свнутривен-нымвведениемсинтетическогобрадикининафирмы«Sandoz»вдозе100мкг/кг,чтосоответствуетзначительнойпатологическойактивациикалликреин-кининовойсистемы.Препаратвуказаннойдозевводиливхвостовуювенусоскоростью0,2мл/мин.

2.3.

^ММ^ее^тт^оо^дд^ии^кк^аа^гг^ии^сс^тт^оо^лл^оо^гг^ии^чч^ее^сс^кк^оо^гг^оо^ии^сс^сс^лл^ее^дд^оо^вв^аа^нн^ии^яя^вв^нн^уу^тт^рр^ее^нн^нн^ии^хх^оо^рр^гг^аа^нн^оо^вв

^(лл^ее^гг^оо^чч^нн^оо^йй^тт^кк^аа^нн^ии^,пп^оо^чч^ее^кк^,пп^ее^чч^ее^нн^ии^,сс^ее^рр^дд^цц^аа^,гг^оо^лл^оо^вв^нн^оо^гг^оо^мм^оо^зз^гг^аа^,сс^ее^лл^ее^зз^ее^нн^кк^ии⁾

Длягистологическогоисследованиядыхательнойсистемыпострадавшихвусловияхпожаравырезалиськусочкиразмерами1х1х0,5смизсреднейтретитрахеи(задняяповерхность),главныхбронхов,прикорневойзоныобоихлегких,атакжекусочкилегкихизнижнихотделов.Аутопсийный(секционный),такжекакиэкспериментальныйматериалфиксировалив10%растворенейтральногоформалина,заливаливпарафиниизготавливалисрезытолщиной5-7мк.Послечегосрезыокрашивалигематоксилиномиэозином,азуром-эозином,вчастиис-следованийиспользовалиокраскуMSB(модификацияД.Д.Зербино).Припод-готовкекзаливкепрепаратовэкспериментальныхживотных,легкиерасправля-литакимобразом,чтобыприготовляемыевпоследствиигистологическиесрезывключаливсебямаксимальнуюплощадьфронтальногосрезалегких,кромето-го,отдельноизготавливалисьпрепаратытрахеинавсемее протяжении.

ДлягистологическогоисследованияпочечнойтканипострадавшихсТТвыре-залиськусочкиразмерами1х1х0,5смизверхнегополюса,нижнегополюсаителапочки.Аутопсийный(секционный)материал,такжекакиэкспериментальныйфик-сировалив10%растворенейтральногоформалина.Длягистологическогоисследо-ванияпочкиэкспериментальныхкрысфиксировалицеликом,чтопозволялооценитьвсеструктурыпочек.Затемпрепаратызаливаливпарафиниизготавливалисерий-

ныесрезытолщиной5-7мкм,споследующейокраскойгематоксилиномиэозином,реактивомШиффа,трихромомпоМассону.

ДлягистологическогоисследованияпеченочнойтканипострадавшихсТТвырезалиськусочкиразмерами1х1х0,5смизправойилевойдолипечени(по2изпериферическойицентральнойчасти).Аутопсийный(секционный)материалфиксировалив10%растворенейтральногоформалина,заливаливпарафинииз-готавливалисерийныесрезытолщиной5-7мкм.Послечегосрезыокрашивалигематоксилиномиэозином,реактивомШиффа, трихромомпоМассону.

Длягистологическогоисследованиясердцавырезалиськусочкиразмерами1х1х0,5смизлевого,правогожелудочков(по2избазальнойчастииверхушечной).Аутопсийный(секционный)материалфиксировалив10%растворенейтральногоформалина,заливаливпарафиниизготавливалисерийныесрезытолщиной5-7мкм.Послечегосрезыокрашивалигематоксилиномиэозином,поМалориазур-эозиномитрихромомпоМассону.Контрактурныеповреждениякардиомиоцитовоценивалисьприполяризационноймикроскопии.Вполяризационномсветекон-трактурыяркосветятсянатемнойфонеанизотропии.

Длягистологическогоисследованиятканиголовногомозгавырезалиську-сочкиразмерами1х1х0,5см.Аутопсийный(секционный)материалфиксировалив10%растворенейтральногоформалина,заливаливпарафиниизготавливалисерийныесрезытолщиной5-7мкм.Послечегосрезыокрашивалигематоксили-номиэозином,поМалориазур-эозином.Дляоценкифункциональногосостоя-нияневроцитовиспользовали окраскутолуидиновымсинимпометодуНиссля.

ДлягистологическогоисследованияселезеночнойтканипострадавшихсТТвырезалиськусочкиразмерами1х1х0,5см.Аутопсийныйматериалфиксиро-валив10%растворенейтральногоформалина,заливаливпарафиниизготавли-валисерийныесрезытолщиной5-7мкм.Послечегосрезыокрашивалигематок-силиномиэозином,азур-эозиномпоРомановскому.Функционально-морфологическоеисследованиеселезенкисостояловкомплексеморфологиче-скогоиморфометрическогоизученияматериала.Морфометрическоеиссле-дованиепроводилосьпометодамВейбеля(WeibelE.R.,1970)иГ.Г.Автанди-лова(1990).Спомощьюокулярнойсеткив10поляхзренияопределялсяудель-

ныйобъембелойпульпы,фолликуловселезенки.Отдельновысчитываласьудельнаяплощадьгерминативныхцентровспоследующимсопоставлениемсобщимобъемомспецифическойпаренхимыселезенки.Производилсяподсчетчислаклетокмаргинальнойзоныв10поляхзрения.Рассчитывалосьабсолют-ноечислоклетокопределенноготипанаединицеповерхностисрезаселезенки.Клеточныеэлементыподсчитывалисьприувеличении900.Приэтомисследо-валосьнеменее500клеток.Учитывалисьследующиевидыклеток:лимфоци-ты,плазматическиеклетки, макрофаги, иммунобласты, лейкоциты.