Гематологическое исследование

По изменениям, происходящим в крови, можно судить о патологических процессах, протекающих в организме рыб. Результаты исследований крови с учетом клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных позволяют уточнить диагноз болезни (табл. 12, 13, 14, 15).

Таблица 12. Значение клинических показателей крови рыб
Показатель	Низкие значения	Высокие значения
Эритроцыты	Анемия, гемолиз, нарушение осморегуляции, ровреждение жабр	Стрессовая пилицитамия, дегидрадация, сгущение крови.
лейкоциты	Стрессовая лейкоперия	Лейкоцитоз - реакция на бактериальную инфекцию
Тромбоциты	Слабая свертываемость крови	Тромбоцитоз из-за хронического стресса
Хлориды	Нарушение осморегуляции	Сгущение крови
Холестерин	Нарушение жирового обмена	Хронический стресс, жировая перегрузка при кормлении
Время свертывания крови	Острый стресс, тромбоцитопения	Воздействие антибиотиков или сульфамидов
Глюкоза	Крайнее истощение	Острый или хронический стресс
гликоген	Хронический стресс, истощение	Несбалансированная диета, повреждение печени
Гематокрит	Анемия, гемолиз, повреждение жабр	Сгущение крови, стресс, полицитемия
Гемоглобин	Анемия, гемолиз, повреждение жабр	Сгущение крови, стресс, полицитемия
Метгемоглобин	Норма	Воздейтвие нитритов и некоторых других токсикантов, пересыщение воды кислородом
Белок	Истощение, инфекционные болезни, повреждение почек, неправильное кормление	Сгущение крови, нарушение водного баланса, гемолиз, интенсивный рост гонад

Таблица 13. Показатели красной крови у пресноводных рыб
Рыба	Масса, г	Гематокрит, %	Гемоглобин, г%	Эритроциты млн/мкл	Примечание
Щука	-	24-44	-	1-2	Озеро, разновыростные группы
Белый толстолобик	16,0	43	11,4	2,2	Пруд, весна - лето
Белый толстолобик	140	42	11	2,1	Пруд, осень
Пестрый толстолобик	-	30-37	7,5-8,5	1,14-2,0	Корм - сухие сине-зеленые + комбикорм
Белый амур	27	32	8,6	1,8	Пруд, весна
	320	34	9,6	1,9	Пруд, осень
Карп	17	-	8,9	1,8	Лето, естественные условия
Карп	10-22	-	7,5-8,8	1,4-1,7	Зимовка, ноябрь - декабрь
Карп	10-22	-	8,2-8,7	1,3-1,6	Зимовка, февраль - март
Карп	200-350	-	8,6-9,9	1,4-1,7	Лето, июнь - июль
Карп	400-500	38	8,6-10,4	1,14-1,44	Осень

Таблица 14. Количество лейкоцитов в крови у рыб, тыс/мкл
Рыба	Возраст	Количество лейкоцитов	Примечание
Лещ	-	45-120	Сезонные колебания
Угорь	-	90	-
Щука	-	28-110	Сезонные колебания
Судак	-	35-95	Сезонные колебания
Голавль	-	40	Сезонные колебания
Карась	-	51	-
Линь	-	52	-
Карп	0+	14-17	Пруд
Карп, 20-26 г	-	9-23	Пруд
Карп, 300-700 г	-	22-23	Пруд
Карп, 1400 г	-	43-59	Пруд
Карп	-	23	Самец-производитель
Карп	-	16	Самка-производитель
Белый толстолоб	1+	98±14	Пруд
Пестрый толстолобик	1+	62±8	Пруд
Радужная форель	-	34	Пруд
Ручьевая форель	-	26	Пруд

Таблица 15. Состав и свойства крови рыб
Показатели	Белуга	Стерлядь	Осетр	Севрюга	Лосось	Форель	Щука	Линь	Лещ	Карась	Сазан	Окунь	Сом
Эритроциты, млн/мкл	0,8	1,5	0,8	1,6	1,3	1,2	1,4	1,8	1,7	1,6	2,6	1,5	1,4
Гемоглобин, г%	8,7	10,3	11,5	11,3	9,8	10,0	7,9	8,9	9,6	8,9	9,7	9,1	7,0
Гематокрит, %	36,0	43,0	47,0	40,0	36,0	30,0	20,0	22,0	24,0	23,0	27,0	29,0	20,0
Общее количество крови к массе тела, %	2,8	3,2	2,5	3,0	2,3	2,4	2,0	1,9	3,9	4,2	2,5	1,2	1,6
Количество лейкоцитов, тыс/мкл	-	-	-	40,4	32,0	25,5	37,5	52,0	49,0	51,0	43,0	40,0	38,0
Лейкоцитарная формула, %
эозинофилы	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
нейтрофилы	-	-	-	-	12,0	18,0	9,0	4,0	18,0	15,0	6,0	9,0	11,0
полиморфоядные	-	-	-	-	15,0	2,0	4,0	1,0	2,0	6,0	3,0	4,0	2,0
лимфоцыты	-	-	-	-	71,0	64,0	84,0	93,0	77,0	76,0	88,0	85,0	76,0
моноциты	-	-	-	-	2,0	16,0	3,0	2,0	3,0	3,0	3,0	2,0	1,0
Белок общий, %	-	-	5,1	5,9	6,3	5,8	6,7	3,6	4,7	5,1	7,1	8,5	6,8

Кровь для исследования берут пастеровской пипеткой из сосудов гемального канала хвостового стебля. Место взятия обрабатывают 70%-ным спиртом, просушивают ватным тампоном.

Определение количества эритроцитов и лейкоцитов. Кровь набирают в смеситель меланжера, используемого для подсчета эритроцитов млекопитающих, до метки 0,5 или 1 и насасывают жидкость для окрашивания и разведения крови до метки 101 (раствор А: нейтральрот - 25 мг; натрий хлористый - 0,6 г, вода дистиллированная-100 мл; раствор Б: кристаллвиолет - 12 мг, натрий лимоннокислый - 3,8 мг, формалин - 0,4 мл, вода дистиллированная - 100 мл). Раствор А набирают до половины расширения смесителя, раствор Б - до метки 101. (Готовят эти растворы непосредственно перед исследованием, хранить можно в холодильнике не более недели.) Под действием растворов ядра лейкоцитов окрашиваются в фиолетово-красный цвет, а цитоплазма - в розовый. В эритроцитах ядра окрашиваются в синий цвет.

После наполнения снимают резиновую трубку со смесителя, захватывают его между большим и средним пальцами и сильно встряхивают 2-5 мин, после чего выпускают из капилляра 3 капли жидкости, а 4-й каплей заряжают счетную камеру.

Принцип метода сводится к подсчету форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов) в камере Горяева. Сначала под малым увеличением микроскопа находят сетку и устанавливают равномерность распределения клеток, а затем подсчитывают их. Эритроциты считают в 5 квадратах (80 малых), расположенных по диагонали камеры Горяева. В каждом малом квадрате учитывают эритроциты, находящиеся внутри него, и те, которые касаются или лежат на его верхней и левой линиях.

Количество эритроцитов определяют по формуле

где m - общее количество клеток в 80 квадратах; γ - степень разведения крови; Х - число эритроцитов в 1 мкл.

Лейкоциты подсчитывают в 25 больших квадратах, разделенных на малые (400 малых), и определяют по формуле

где m - общее количество лейкоцитов; γ - степень разведения крови; Х - число лейкоцитов в 1 мкл; 400 - число просмотренных малых квадратов.

Выведение лейкоцитарной формулы. У рыб различают следующие виды лейкоцитов: лимфоциты, моноциты, базофилы, нейтрофилы, эозинофилы (цв. табл. II). Некоторые авторы выделяют группу полиморфноядерных лейкоцитов.

Лимфоциты - небольшие клетки, немного меньше эритроцитов. Почти вся клетка заполнена ядром, цитоплазма видна в виде узкого ободка вокруг ядра. По Романовскому ядро окрашивается в фиолетово-розоватый цвет, цитоплазма - в голубоватый.

Моноциты - самые крупные клетки, ядро бобовидное, расположено эксцентрично, цитоплазма вакуолизирована, зернистость отсутствует.

Нейтрофилы - круглые клетки, имеют овальное, палочковидное или сегментированное ядро, расположенное у края клетки. В зависимости от возраста и формы ядра клетки разделяют на миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные. Зернистость в цитоплазме окрашивается по Романовскому - Гимзе в фиолетово-розовый цвет.

Эозинофилы - по морфологии сходны с нейтрофилами. В цитоплазме находятся крупные многочисленные зернышки розового цвета.

Базофилы отличаются наличием в цитоплазме зерен фиолетового цвета.

Высушенный и фиксированный метанолом или спирт-эфиром (1:1) мазок крови окрашивают краской Романовского - Гимза. Раствор краски предварительно разводят нейтральной дистиллированной водой (1-2 капли на 1 мл воды). Разведенную краску подслаивают под предметное стекло, положенное мазком вниз, или красят мазки в контейнерах. В зависимости от температуры воздуха и качества краски мазок окрашивают 30-60 мин. После окраски препарат быстро ополаскивают водой, высушивают на воздухе, просматривают под микроскопом с иммерсионным объективом. Обычно просчитывают 200 лейкоцитов общепринятым методом.

Определение содержания гемоглобина.

Метод Сали. В градуированную пробирку гемометра Сали до метки 2 пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. Капиллярной пипеткой набирают кровь до метки 20 мкл и вносят в пробирку с соляной кислотой. Затем перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 5 мин. После чего в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду, перемешивают и подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках.

Количество гемоглобина крови отсчитывают по нижнему мениску на градуированной пробирке. Выражают в г%.

Фотометрический метод. Мерной пипеткой в пробирку осторожно наливают 5 мл трансформирующего раствора (бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль - 0,2, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода - до 1 л). Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови, промывая ее раствором путем попеременного вдувания и выдувания. Содержимое пробирки перемешивают и оставляют на 20 мин в холодильнике. Затем раствор из пробирки наливают в кюветы ФЭК и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения. Расчет гемоглобина (г/л) производят по формуле Х=D₅₄₀·367,1 г/л, где D₅₄₀ - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент перерасчета.