Занятие № 15. «Обмен нуклеиновых кислот и молекулярные механизмы синтеза белка»

Цель занятия: выделить из биологического материала дезоксирибонуклеотид; изучить его качественный состав; обобщить знания о нуклеотидах.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Нуклеотиды: строение и биохимические функции.

2. ДНК и РНК, строение, структура, биологическая роль.

3. Биосинтез ДНК (репликация).

4. Биосинтез РНК (транскрипция).

5. Биосинтез белка (трансляция).

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа работа.

Опыт 1. Выделение дезоксинуклеопротеида из банана.

Приборы. 1. Весы.

2. Ножницы.

3. Ступка для растирания.

4. Мензурка.

5. Центрифуга.

6. Центрифужные пробирки.

7. Химический стакан, 50-100 мл.

8. Деревянная палочка с насечками.

Реактивы. 1. Банан.

2. Буферный раствор (120 мл H₂O, 1,5 г NaCl, 5 NaHCO₃, 5 мл жидкого средства для мытья посуды).

3. Изопропиловый спирт охлажденный в морозилке (либо этиловый спирт).

.

1. Половину банана измельчите до состояния кашицы любым удобным для Вас способом.

2. 5 мл полученного пюре перенесите в стаканчик и добавьте 10 мл буферного раствора.

3. Полученную смесь энергично перемешивайте в течение не менее 2 минут.

4. Содержимое стаканчика разлейте в центрифужные пробирки. Центрифугируйте 5 минут при 1 тыс. об/мин.

5. Надосадочную жидкость (не менее 5 мл), слейте в чистую пробирку.

6. Аккуратно нанесите 10 мл охлажденного изопропилового (этилового) спирта на стенку слегка наклоненной пробирки. Позвольте спирту медленно стечь по стенке. Если вы все сделали правильно, спирт, плотность которого меньше плотности буфера, останется на поверхности раствора.

7. Поместите тонкую стеклянную или деревянную палочку, например карандаш, в раствор таким образом, чтобы ее кончик оказался непосредственно под границей между буфером и спиртом, и очень осторожно в течение 1 мин поворачивайте попеременно в разные стороны. При этом наиболее длинные фрагменты ДНК накрутятся на палочку. Затем вытащите палочку – спирт заставит ДНК прилипнуть к концу палочки, и вы увидите на нем прозрачный вязкий осадок.

8. Выделенный ДНП перенесите в другую пробирку и используйте для дальнейшего анализа на составляющие компоненты.

Опыт 2. Качественное открытие ДНК.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Стеклянная палочка.

4. Водяная баня, кипящая.

Реактивы. 1. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

2. Дифениламиновый реактив.

3. Сульфат меди, 2%-ный раствор.

1. Возьмите две пробирки.

2. Перенесите в каждую пробирку небольшое количество осадка ДНП (из опыта № 1).

3. Добавьте в обе пробирки для растворения ДНП 0,5-1 мл раствора гидроксида натрия.

4. В первую пробирку добавить равный объем дифениламинового реактива^, перемешайте и поставьте на 15-20 мин в кипящую водяную баню.

5. Отметьте изменение окраски.

6. Ко второй пробирке добавьте равный объем 10%-ного раствора NaOH и несколько капель 2%-ного раствора CuSO₄.

7. Отметьте появление окраски.

О наличии каких компонентов структуры ДНП можно судить по результатам опыта? Можно ли подобным образом определить компоненты РНП? Каковы функции этих компонентов в структуре нуклеиновых кислот?

Задание 1. Заполните таблицу, обобщающую сведения о механизмах синтеза нуклеиновых кислот и белка.

Процесс	Репликация	Транскрипция	Трансляция
1. Субстраты
2. Ферменты
3. Локализация процесса
4. Направление синтеза новых цепей
5. Этапы процесса
6. Характеристика продукта

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________