Литература

• Васьковский В.Е. Липиды. Соросовский образовательный журнал, 1997, №3, с. 32.

• Камышников В.С. Справочник по клинико–биохимической лабораторной диагностике. Т.2.– Минск: Беларусь, 2000.– 463 с.

• Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз.– СПб.: Питер, 1995.– 304 с.

• Свистунова О.И., Титов В.Н. Желчные кислоты крови: патобиохимия и диагностическое значение (обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика, №1, 1994, стр.15-19.

Занятие № 15

ТЕМА: Обмен липидов 1

Цель: Рассмотреть метаболизм жирных кислот и его регуляцию; биосинтез триацилглицеролов в печени и жировой ткани; регуляцию липогенеза и липолиза; обмен фосфолипидов.

Вопросы для рассмотрения на занятии:

1. Катаболизм жирных кислот (ЖК), его этапы (β-окисление, ЦТК, митохондриальная дыхательная цепь).

2. Активация ЖК под действием ацил-КоА-синтетазы в цитозоле клетки.

3. Транспорт ацил-КоА через внутреннюю мембрану митохондрий (МТХ) с участием карнитина.

4. β-окисление ацил-КоА в матриксе МТХ, связь β-окисления с циклом трикарбоновых кислот и дыхательной цепью.

5. Особенности окисления ЖК с нечетным количеством атомов углерода.

6. Особенности окисления ненасыщенных ЖК.

7. Подсчет суммарного выхода АТФ при окислении ЖК.

8. Окисление глицерина, его энергетический эффект.

9. Энергетический эффект распада триацилглицеролов.

10. Биосинтез ВЖК. Образование ацетил-КоА и его транспорт из митохондрий в цитоплазму.

11. Синтез малонил-КоА. Ацетил-КоА-карбоксилаза, регуляция её активности.

12. Cинтетаза ЖК как многофункциональный белок, локализация в клетке, строение. Ацилпереносящий белок (АПБ). Роль фосфопантотеиновой простетической группы.

13. Реакции катализируемые синтетазой ЖК. Синтез бутирил АПБ. Образование пальмитата. Источники водорода для синтеза ЖК.

14. Синтез ЖК из пальмитиновой кислоты. Элонгация с образованием С₁₈ – С₂₄ ЖК. Образование непредельных ЖК.

15. Регуляция метаболизма ВЖК (β-окисления и биосинтеза ВЖК).

16. Биосинтез ТАГ в жировой ткани и печени. Образование липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) в печени и транспорт жиров в другие ткани.

17. Мобилизация жира в жировой ткани (липолиз). Триацилглицерол-, диацилглицерол- моноацилглицероллипазы.

18. Гормональная регуляция синтеза и мобилизации жиров. Ожирение.

19. Метаболизм фосфолипидов (ФЛ). Обмен глицерофосфолипидов Биологическое значение различных фосфолипаз. Биосинтез фосфатидилхолина, фосфатидилэтаноламина, фосфатидилсерина

20. Обмен сфинголипидов. Синтез церамида и его производных. Катаболизм сфингомиелина и гликосфинголипидов, генетические дефекты энзимов.

21. Значение определения концентрации метаболитов липидного обмена в сыворотке крови. Гиперлипидемия (гиперлипемия) алиментарная и патологическая.

22. Определение уровня общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом. Принцип метода. Ход определения. Норма. Клинико-диагностическое значение.

Практическая работа

Опыт № 1:Определение общих липидов в сыворотке крови по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом.

Группу общих липидов плазмы (сыворотки крови) составляют нейтральные жиры (триацилглицеролы), фосфолипиды (ФЛ), свободный или неэстерифицированный холестерин (НЭХС), эфиросвязанный холестерин (ЭХС), гликолипиды, неэстерифицированные (свободные) ЖК (НЭЖК). Подавляющее большинство перечисленных соединений (прежде всего ФЛ, ХС, ТАГ) образуют ассоциаты (липидно-белковые комплексы, ЛП) с белками – апопротеинами. Большая часть НЭЖК образует комплексы с альбумином крови. Содержание общих липидов в сыворотке крови здоровых людей составляет 4–8 г/л.

Гиперлипидемия (гиперлипемия) – увеличение концентрации общих липидов плазмы как физиологическое явление может наблюдаться через 1–4 ч после приема пищи. Концентрация липидов в крови изменяется при ряде патологических состояний. Гиперлипемия отмечается у больных сахарным диабетом, при нефротическом синдроме, остром и хроническом гепатитах, атеросклерозе и других заболеваниях.

Принцип метода. Продукты гидролиза липидов, образующиеся под действием серной кислоты, взаимодействуют с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов в сыворотке крови.

Техника выполнения. Реактивы: (1) стандартный раствор (общие липиды 8 г/л) – реактив 1; (2) раствор ванилина (ванилин и кислота ортофосфорная) – реактив 2; (3) кислота серная концентрированная. Готовят опытную, стандартную и контрольную пробы, как указано в таблице.

Отмерить (мл)		Проба	Стандарт	Контрольный раствор
Сыворотка Реактив 1 Кислота серная конц.		0,1 – 1,50	– 0,1 1,50	– – 1,50
Перемешивают и нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. После охлаждения пробирок проточной водой отмеряют
Гидролизат Реактив 2	0,10 1,50		0,10 1,50	0,10 1,50

Перемешивают и оставляют стоять 50 мин при температуре от 15–25 ºС. Не позднее чем через 60 мин измеряют оптическую плотность пробы (А₁) и стандарта (А₂) против контрольного раствора в кювете толщиной 0,5 см при длине волны 510–550 нм.

Расчёт: С_оп (г/л) = С_ст  А₁ /А₂

Самостоятельная работа

Заполнить таблицу «Метаболизм жирных кислот»

Процессы	β-окисление	Биосинтез ЖК
Локализация процесса
Переносчик субстрата через митохондриальную мембрану
Коферменты окислительно-восстановительных реакций
Источник присоединяемого фрагмента или отщепляемый фрагмент
Регуляторные ферменты
Регуляторные факторы: активаторы ингибиторы