Задание № 2 Цветные реакции на белки. Теоретические основы:
Для обнаружения белка, кроме реакции осаждения используют цветные реакции на белки. К ним относятся ксантопротеиновая, биуретовая и др. Для лабораторных работ применяют белки мяса, яиц, молока, гороха, пшеничной муки.
1. Ксантопротеиновая реакция: указывает на наличие в белке молекул циклических аминокислот. При добавлении к белку концентрированной азотной кислоты появляется желтое окрашивание. Оно связано с нитрированием ароматического ядра. При взаимодействии аминокислот с азотной кислотой образуются нитросоединения окрашенные в желтый цвет.
нагревание
-СН2-СН-СООН + НОNO2
|
NH2
-CH2-CH-COOH
|
NH2
Н
NO2
Фенилаланин
n-нитрофенилаланин
(Желтого цвета)
Биуретовая реакция (реакция на полипептидные связи). Щелочной раствор при добавлении солей меди принимает ярко-фиолетовую окраску.
Сульфгидрильная реакция (реакция на содержание аминокислоты).
При нагревании белка с ацетатом свинца образуется черный осадок сульфида свинца, т.к. сера входящая в состав аминокислоты при нагревании превращается в ион и соединяется с ионом свинца.
S2- + Pb2+ = PbS
Алгоритм выполнения
Ксантопротеиновая реакция: указывает на наличие в белке молекул аминокислот, содержащих бензольные ядра, например тирозин. При взаимодействии аминокислот с азотной кислотой образуются нитросоединения, окрашенные в желтый цвет.
К 1 мл раствора белка добавляют 5-6 капель концентрированной азотной кислоты до появления белого осадка или мути от свернувшегося белка. Реакционную смесь нагревайте до окрашивания осадка в желтый цвет. В процессе гидролиза идет растворение осадка. Охладите смесь и добавьте к ней осторожно по каплям избыток концентрированного раствора аммиака. Окраска переходит в оранжевую.
Запишите уравнение реакции:
_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Биуретовая реакция: с помощью биуретовой реакции обнаруживают наличие пептидных группировок в молекулах белка. Белки с солями дают красно-фиолетовое окрашивание в следствии образования сложных соединений. В пробирку налейте 1-2 мл раствора белка, 20% едкого натра или едкого калия. Затем прилейте 3-4 капли разбавленного, почти бесцветного раствора медного купороса и содержимое пробирки тщательно перемешайте.
Что наблюдается? Каков цвет раствора?
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
Открытие серы в белках: в пробирку налейте 0,5 мл 10% раствора уксусно-кислого свинца и 2 мл едкого натра до растворения образовавшегося осадка гидроокиси свинца. В другую пробирку налейте 2-3 мл белка и прилейте такой же объем плюмбита натрия. Нагрейте смесь до кипения. При нагревании белок подвергается гидролизу и образуется H2S. Раствор окрашивается в темно-коричневый цвет.
Объясните почему:
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
2. Напишите уравнение реакции:
а) взаимодействия соли свинца со щелочью;
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
б) взаимодействие щелочи с полученным осадком гидроокиси свинца;
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
в) реакцию взаимодействия сероводорода с плюмбитом натрия.
____________________________________________________________________________________________________________________________________________
На основании какого полученного вещества можно судить о наличии серы в белках?
____________________________________________________________________________________________________________________________________________