Практична робота студента

1. Вивчити та замалювати мікропрепарат культури клітин Vero (демонстрація).

2. Вивчити та замалювати мікропрепарат культури клітин Vero з ЦПД під дією вірусу (демонстрація).

3. Зробити облік РНГА з парними сироватками від хворого на грип (демонстрація).

4. Живильні середовища; курячий ембріон; культури клітин, які використовуються для культивування інфікованого вірусом матеріалу (демонстрація).

Методичні рекомендації по виконанню практичної роботи

1. Перещеплювальна культура клітин Vero

Д ля культивування вірусів в лабораторній практиці вірусолог застосовує різноманітні культури клітин. В демонстраційному препараті студенту запропоновано культуру клітин нирок зеленої мавпи. До цієї культури клітиними чутливими є віруси Коксакі В (1-6), поліовіруси (1-3), арбовіруси, реовіруси, вірус везикулярного стоматиту, вісповакцини, простого герпесу.

2. Цитопатична дія поліовірусу (типу іі) на культуру клітин Vero

Д осліджуваний матеріал, в якому припустимо знаходиться вірус, який нас цікавить, суспендують у невеликому об'ємі культурального середовища, фільтрують через міліпоровий фільтр з метою видалення бактерій і вносять в колбу-матрац, яка містить моношарову культуру чутливих клітин. Через 48 – 72 години реєструють появу змін. Неозброєним оком видно повну чи часткову деградацію моношару і його злущування з поверхні флакона. Морфологічні зміни клітин виявляють за допомогою інвертованого мікроскопа.

Під час репродукції вірусу поліомієліту (типу ІІ), в даній культурі клітин, виявляють характерну цитопатичну дію за типом повної дегенерації моношару клітин: клітини, що містять вірус, стають круглішими, зморшкуватими, у ядрах відбуваються пікнотичні зміни.

2. Середовище 199 та середовище Ігла

Середовище 199 – синтетичне середовище, яке включає біля 60 компонентів. Застосовується для культивування перещеплювальних та первинно-трипсонізованих культур клітин.

С ередовище Ігла – містить мінімальний набір амінокислот (13) і вітамінів (8). Застосовується для культивування диплоїдних та перещеплювальних культур клітин.

Курячі ембріони. Овоскоп

Д ля виділення деяких вірусів застосовуються курячі ембріони, розвиток яких відбувся упродовж 5 − 12-14 діб. При цьому вік ембріонів, які застосовують для дослідження, спосіб інфікування та строки отримання максимальної кількості вірусів (час інкубації) залежить від біологічних властивостей культивованих вірусів та їх тропізму. Перед інфікуванням курячі ембріони овоскопують для визначення їх життєздатності. Ознаки живого ембріона – наявність самостійних рухів, добре виражений судинний малюнок, пульсація судин.

Існує декілька способів інфікування курячих ембріонів:

• у порожнину амніону та алантоїсу;

• на хоріоналантоїсну оболонку;

• у жовчний мішок.

2. Рнга з парними сироватками для діагностики герпетичної інфекції

РНГА оцінюється за наявністю чи відсутністю аглютинації еритроцитів. Приріст антитіл відмічають при одночасному титруванні парних сироваток, які були взяті в перші дні захворювання (або імунізації) та на 15-20 добу від початку захворювання (або закінчення імунізації). Діагностичне значення має виявлення 4-кратного та більше збільшення титру антитіл у другій порції сироватки крові.

Зробіть облік результату, зробіть висновок.

Протокол дослідження

Досліджувана особа	День обстеження	Титр сироватки хворого
		1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	К
Хворий А.	2-й
	15-й

Додаток 1