10 Вопрос. Сущность и методика окраски по Граму, Ольту, Цилю - Нильсену, Ожешко, Козловскому.

Простая окраска. Рабочий раствор краски из капельницы или пипетки наносят на 2—3 мин. на фиксированный мазок.

Более интенсивного окрашивания достигают увеличением продолжительности окрашивания или подогреванием на спиртовой лампочке до появления паров. Если препарат перекрашен, то можно частично удалить краску обильным промыванием водой или непродолжительным промыванием спиртом. Более сильное средство обесцвечивания — промывание препарата 5-проц. раствором серной кислоты или 15-проц. раствором азотной кислоты.

Специальные окраски. Окраска по Граму позволяет делить всех микробов на две группы: на микроорганизмы, положительно красящие по Граму (грамположительные микробы), и на микробов, отрицательно красящихся по Граму (грамотрицательные микроорганизмы).

Принцип окраски по Граму основан на том, что положительно красящиеся по Граму микробы имеют в своем поверхностном слое вещества (рибонуклеат магния с белками), которые при окрашивании парарозанилиновыми красками (генцианвиолет, кристаллвиолет, метилвиолет, викторияблау) в присутствии иода дают прочные соединения, не разрушающиеся спиртом. Микробы, отрицательнэ красящиеся по Граму, в своем составе не имеют таких веществ и потому при окрашивании этими красками в присутствии иода не дают прочных соединений, и при действии спирта обесцвечиваются.

Окраска по Граму. Высушивание мазка; фиксация; окраска феноловым генцианвиолетом — 2—3 мин.; обработка раствором Луголя (1,0 иода; 2,0 иодистого калия и 300,0 дестиллированной воды) — 2—3 мин., обесцвечивание 70° спиртом до серостального цвета (цвет дыма папиросы) — около 10 сек.; промывание водой; окрашивание контрастной краской (водным раствором сафранина, раствором эозина или фуксином Пфейфера) в течение 2—3 мин.; обмывание водой; высушивание фильтровальной бумагой. Грамположительные микробы красятся в темнофиолетовый цвет, а грамотрицательные — в красный.

Окраска кислотоупорных микроорганизмов по Циль-Нильсену. Высушивание мазка; фиксация; окрашивание феноловым фуксином Циля — 1—3 мин. с подогреванием до появления паров; промывание водой; обесцвечивание 5-проц. раствором серной или 15-проц. раствором азотной кислоты до исчезновения розовой окраски — 2— 5 сек.; промывание водой; дополнительная окраска метиленовой синью — 0,5—1 мин. Кислотоупорные микроорганизмы окрасятся в красный цвет, прочие в синий.

Окраска по Козловскому (бруцелл в патологическом материале). Мазок фиксируют, красят 2-проц. водным раствором сафранина с подогреванием до появления первых пузырьков газа, промывают водой, дополнительно красят 1-проц. раствором малахитовой зелени 0,5—1 мин. Бруцеллы яркокрасные, фон зеленый.

Способ Ольта. Фиксированный препарат красят 1—2 мин., при нагревании, 4-проц. водным раствором сафранина; смывают водой; не высушивая, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Микробы красные, а капсулы оранжевожелтые.

Методика окраски по Ожешко:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5 % раствор соляной кислотой и подогреть на пламени в течение 2-3 мин.

2. Кислоту слить, препарат промыть водой, просушить и фиксировать над пламенем. Затем окрасить по Цилю-Нильсену.Споры бактерий приобретают красный цвет, а вегетативные формы - синий.