12 Вопрос.

Возбудитель некробактериоза - Fusobacterium necrophorum из семейств Bacteroidaceae, рода Fusarium. Микроб выделен Р. Кохом в1881 г. из изъязвленной роговицы барана, пораженного оспой, в 1882 году он был обнаружен и подробно описан Леффлером при дифтерии телят. В последующем его выявляли Шютц и М. Г. Тартаковский. Чистую культуру F. necrophorum первыми получили Банг (1890) и Шморл (1891).

Некробациллез - антропозооноз, характеризуется гнойно-некротическими поражениями кожи, слизистых оболочек подлежащих тканей, иногда паренхиматозных органов.

Морфология и тинкториальные свойства.

Микроб полиморфный. В препаратах из свежих культур и свежих некротических фокусов имеют форму палочек или длинных зернисто-окрашенных четкообразных переплетающихся нитей длиной 100-300 мкм (могут быть и короче 30-50 мкм), отдельные нити достигают 400 мкм. Некоторые нити формируют шаровидные и колбовидные вздутия. Длина изолированных палочек 2-5 мкм.

В мазках из старых культур и отпечатках из хронических очагов поражения, особенно инкапсулированных, бактерия некроза имеет форму коротких палочек длиной 0,7-4 мкм и шириной 0,3-0,5 мкм. Окрашиваются они зернисто, неравномерно, часто по концам более интенсивно (биполярно). В таких препаратах встречаются также кокковидные формы. Бактерия неподвижна, жгутиков не имеет, спор и капсулу не образует.

Спиртоводными растворами анилиновых красителей окрашивается неравномерно, с промежутками, по Граму отрицательно. Хорошо красится фуксином Циля, синькой Леффлера, по Романовскому-Гимзе и особенно по Муромцеву.

Культивирование.

Бактерия некроза - строгий анаэроб. Для его культивирования используют среду Китт - Тароцци, бульон Мартена, печеночный бульон Хоттингера, сывороточный и глюкозо-кровяной агар, полужидкий агар, мозговую среду. Добавление к среде Китт - Тароцци 10-20 % свежей бычьей сыворотки и 0,2-0,5 % глюкозы приводит к более интенсивному росту микроба и повышению газообразования. Температурный оптимум 36-38 °С, рН среды 7,4-7,6.

На среде Китт - Тароцци через 24-48 ч появляется помутнение и на кусочках печени образуется хлопьевидный осадок; газообразование слабое, но у отдельных штаммов оно выражено хорошо. Через 5-8 суток наступает просветление среды и выпадение крошковатого осадка, разбивающегося при встряхивании в равномерную муть. При посеве в высокий столбик сывороточного агара через 4-5 дней образуются чечевицеобразные, мелкозернистые, с радиальными отростками колонии.

На поверхности глюкозо-кровяного агара растет при создании вакуума до 4-10 мм ртутного столба, на 2-3-и сутки появляются мелкие круглые или продолговатые росинчатые колонии, увеличивающиеся в размерах к 4-5-му дню. Иногда колонии окружены слабой зоной зеленоватого гемолиза. Поверхность колоний гладкая, матовая. При помещении культуры в аэробные условия колонии продолжают расти, но становятся непрозрачными и шероховатыми.

Микроб хорошо растет на мозговой среде и при добавлении 0,05 % сернокислого железа вызывает ее почернение за счет образования сероводорода.

Биохимические свойства.

Бактерия некроза ферментирует с образованием кислоты и небольшого количества газа арабинозу, глюкозу, галактозу, левулёзу, мальтозу, сахарозу, салицин и непостоянно - глицерин, дульцит, маннит и инулин. Лактозу ферментирует слабо. Желатину и свернутую сыворотку не разжижает, не переваривает яичный белок, слабо и непостоянно пептонизирует молоко, образует индол и сероводород. Аммиак не вырабатывает. Не восстанавливает нитраты в нитриты.

Устойчивость.

Возбудитель некробактериоза относительно нестойкий микроб, но может длительное время сохраняться в различных объектах внешней среды. В фекалиях сохраняет жизнеспособность до 50 суток, в моче - до 15 суток, на поверхности почвы, покрытой травой, - до 10 суток, в почве летом - 15 дней, зимой - не более 60 дней, в водопроводной и дистиллированной воде - до 15 суток, молоке - до 35 суток, в физрастворе - до 45 суток. При воздействии прямых солнечных лучей погибает через 12 ч. Культуры, высушенные при доступе воздуха, теряют жизнеспособность через 72 ч, лиофильно высушенные и помещенные в анаэробные условия сохраняют ее до 15 месяцев; в замороженном состоянии в культурах бактерии выживают 30-40 дней. При нагревании до 65 °С бактерии гибнут в течение 15 мин, при 70 °С - через 10 мин, при кипячении - моментально.

Возбудитель некробактериоза чувствителен к дезинфектантам: 5% -ные растворы едкого натра или калия убивают его через 10 мин; 2,5 % -ный креолин - через 20 мин; 5 % -ный лизол - через 9 мин; 2 %-ный фенол - через 2 мин; 2,5 %-ный формальдегид - через 13 мин; перманганат калия 1 : 1000 - через 10 мин.

Бактерия некроза высокочувствительна к антибиотикам тетрациклинового ряда, в меньшей мере - к пенициллину и стрептомицину; устойчива к мицерину и колимицину (И. С. Бычков, 1976).

Патогенность.

В естественных условиях некробактериозом заболевают лошади, крупный рогатый скот, буйволы, олени, овцы, козы, свиньи, собаки, кошки, куры, гуси, а также дикие животные - косули, сибирские козероги, лоси, архары, антилопы, ламы, зебры, бегемоты, бобры, сурки, ондатры, суслики, песчанки, пресмыкающиеся. К некробактериозу восприимчив человек. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши.

У лошадей некробактериоз протекает в форме гангренозного мокреца. У взрослого крупного рогатого скота поражаются нижние части конечностей, кожа вымени, слизистая оболочка влагалища и матки; у телят наблюдается дифтеритическое воспаление слизистых оболочек ротовой полости, гортани и внутренних органов. Для северных оленей характерен некробактериоз копыт (копытная болезнь). Взрослые свиньи болеют редко, но восприимчивы поросята-сосуны; у них отмечают некротический стоматит, ринит, дерматит и энтерит. У овец наиболее часто повреждаются конечности. У собак развивается флегмонозный и пустулезный дерматит с подкожными абсцессами. У кур поражаются глотка, корень языка, гортань, пищевод, внутренние органы.

Бактерии некроза продуцируют экзотоксин, эндотоксин и гемотоксин. Экзотоксин вырабатывается при культивировании микроба в жидких питательных средах, максимальная концентрация его достигает в 24-36-часовых культурах. Более интенсивно его синтезируют штаммы, выделенные от лошадей. Этот токсин нестоек и разрушается при 55 °С в течение 10 мин, при 100 °С - через 5 мин. Добавление к экзотоксину 0,3 % формалина переводит его в анатоксин. Эндотоксин образуется при распаде микробных клеток, обладает сильным некротизирующим действием.

Гемотоксин интенсивно продуцируется на средах из свежего мяса с добавлением пептона, 0,5 % глюкозы, фосфата натрия и небольшого количества крови; обладает термолабильными свойствами и разрушается при 48 °С через 15 мин, при 56 °С полностью инактивируется, при 4 °С сохраняется 2 месяца. Лизирует эритроциты лошади, крупного рогатого скота, барана, свиньи, морской свинки, кролика и голубя.

Патогенез.

Некробактериоз – послераневая инфекция. Бактерия некроза интенсивно размножается в травмированных тканях: они недостаточно снабжаются кислородом вследствие нарушения целостности капилляров. Это приводит к созданию анаэробных условий. В здоровых тканях, нормально насыщенных кислородом, возбудитель не размножается. Особенно благоприятные условия для своего развития бактерии находят в крови гематом.

В организме бактерия некроза синтезирует токсические компоненты, блокирующие внутриклеточные ферментные системы и вызывающие некроз окружающих тканей. Процесс осложняется механической закупоркой капилляров интенсивно размножившимися микробными клетками.

Из очага поражения микроб гематогенным путем может распространяться по организму, в значительной степени этому способствует поражение стенок кровеносных сосудов и отрыв тромбов, инфицированных бактериями некроза. В результате процесс распространяется на соседние ткани, возникают вторичные очаги в коже, сухожилиях, костях. Проникновение бактерий в кровь приводит к развитию септицемии и образованию метастатических некротических очагов в легких, сердечной мышце, печени. Заболевание приобретает злокачественное течение и нередко заканчивается смертью.

Антигенная структура.

Опыты с адсорбцией антител показали, что, у бактерии некроза имеются штаммы, идентичные в антигенном отношении. Наряду с этим установлено наличие отдельных серологических типов, различающихся по составу антигенов. Обнаружено также присутствие общих антигенов у возбудителя некробактериоза и фузобактерий.

Иммунитет.

У переболевших животных иммунитет не вырабатываеться: они могут повторно заболевать некробактериозом. Его невозможно также создать искусственно.

При внутривенной иммунизации кроликов убитыми или живыми бактериями некроза в их сыворотках обнаруживали специфические преципитины, агглютинины и комплементсвязывающие антитела. Эти же антитела выявляли в сыворотках больных животных и людей. Однако их защитная функция невелика.

Диагностика.

В бактериологическую лабораторию направляют кусочки пораженных органов и тканей с прилегающей здоровой тканью, целые трупы мелких животных и птиц. Содержимое из некротизированных очагов можно набирать в пастеровские пипетки, запаивать и пересылать в лабораторию.

Для прижизненного исследования берут некротические поражения на границе омертвевшей и здоровой ткани после предварительной механической очистки от распавшейся ткани и гноя. Одновременно из этих же участков готовят несколько препаратов-отпечатков на предметных стеклах. При поражении ротовой полости, кроме некротических наложений, материалом для биологического исследования может быть слюна больного животного. В лабораторию пробы отправляются в свежем виде (с нарочным) или же в 30 % -ном стерильном глицерине.

Мазки, приготовленные из некротизированной ткани, фиксируют спирт-эфиром 10 мин и окрашивают синькой Леффлера (лучше с подогреванием 3-4 мин), по Муромцеву, Романовскому-Гимзе, а также Граму. В мазках обнаруживают зернистоокрашенные нити или тонкие длинные грамотрицательные палочки. Микроскопическое исследование дает основание поставить только предварительный диагноз.

Бактериологическое исследование.

Для посевов используют кусочек некротизированной ткани, отобранной на границе со здоровой. Его помещают в среду Китт - Тароцци с 10 % свежей крови или сыворотки крупного рогатого скота и 0,5 % глюкозы, дополнительно можно засевать на полужидкий агар. Посевы инкубируют 2-3 суток при температуре 37 °С. Для определения сопутствующей аэробной микрофлоры дополнительно производят посевы на МПА и МПБ.

При выделении культур на глюкозо-кровяном агаре кусочек некротизированной ткани растирают, суспендируют в физиологическом растворе и дробно засевают на поверхность агара. Сахарный агар высоким столбиком расплавляют, охлаждают до 45 °С и вносят материал. Культуры выращивают в анаэробных условиях, рост обычно появляется через 2-3 суток. Материал часто бывает загрязнен сопутствующей микрофлорой, поэтому для выделения чистой культуры бактерии некроза необходимо предварительно заразить лабораторное животное.

Биологическое исследование.

Для выделения из патологического материала чистой культуры бактерии некроза наиболее пригодны кролики, можно использовать и белых мышей. Кролика заражают под кожу уха в дозе 0,5-1 мл материала или бульонной культуры. Через 2-4 дня на месте введения развивается некротический очаг, распространяющийся на все ухо и мягкие ткани головы. Материал из пораженного очага используют для приготовления мазков и посевов. На 6-l0-й день кролик обычно погибает. При вскрытии обнаруживаются некротические очаги в мышцах головы, брюшной стенки, сердце, печени и других паренхиматозных органах. В результате внутривенного зара­жения животное погибает на 3-5-е сутки. Наблюдают за подопытным кроликом 10 дней.

Белых мышей заражают 0,3-0,5 мл бульонной культуры подкожно в области корня хвоста. На 8-й день в окружности инъекции развивается припухлость и нагноение, на 5-6-й день - некроз, на 8-10-й день хвост отпадает. Мыши погибают на 10-14-й день с явлениями некроза мышц в области заражения, гнойными очагами в печени, легких, сердце.

Для серологического диагноза некробактериоза в 1945 г. Я. Е. Коляков и И. В. Захаров предложили РСК. В качестве антигена использовали экстракт из бактериальной массы 3-недельных культур бактерии некроза на печеночном бульоне с титром до 1 : 40. По предварительным наблюдениям, положительные показания реакции совпадали с клиникой некробактериоза у 95 % животных. С этой целью испытывалась также реакция агглютинации. Однако ни РСК, ни другие серологические реакции не получили практического применения в качестве тестов иммунологического диагноза некробактериоза.

Биопрепараты.

Предложена комплексная терапия с использованием химиопрепаратов. Эффективными средствами лечения оказались сульфаниламиды (сульфадимезин) и антибиотики тетрациклинового ряда (хлортетрациклин, террамицин и дибиомицин).

«Нековак» - ассоциированная вакцина против некробактериоза конечностей крупного рогатого скота. Двухкомпонентная вакцина «Нековак» с имуностимулятором ГМДП (глюкозаминилмурамилпептид).